抗G7单链抗体-AP融合蛋白的构建、表达与鉴定

目的:为了便于临床检测,建立一种G17新型免标自指示剂,用原核表达系统表达抗胃泌素单链抗体融合蛋白(ScFv-AP).方法:通过构建重组质粒pET32a-scFv-AP,选择合适的感受态细胞Rosetta(DE3)及优化表达条件制得目的蛋白.利用固定化金属离子亲和层析技术得到纯品蛋白.再将其作为检测探针运用到双抗体夹心ELISA的方式证明其具有免疫活性与实用性.结果:经Sanger法测序、SDS-PAGE、Western blot证明经金属离子亲和层析技术得到高纯度目的蛋白.经ELISA验证其最低检出限为0.978 ng/ml.实验后确定最佳反应条件为25℃、1 mmol/L IPTG、6 h,每升菌可收获目的蛋白约9.6 mg.目的 蛋白具有较高的灵敏度.结论:成功表达具有免疫反应性的抗胃泌素单链抗体融合蛋白.其具有指示蛋白的作用,与传统酶标抗体相比灵敏度高4倍.