低温冷冻干燥后富血小板纤维蛋白生物学性状的变化

背景:富血小板纤维蛋白在临床上已被用于骨及软组织修复,但是由于其具有生物活性,仅限于短期临床应用.如何稳定保存富血小板纤维蛋白及延长临床应用时间,显得尤为重要.目的:探讨低温冷冻干燥技术对富血小板纤维蛋白形态学以及对富血小板纤维蛋白中血小板释放生长因子活力及释放规律的影响.方法:制备新鲜及冻干富血小板纤维蛋白,将其浸泡于无血清的DMEM基础培养基,收集1,7,14,21 d各个时间点冻干及新鲜富血小板纤维蛋白析出液,进行成纤维细胞培养及血小板衍生生长因子BB含量测定,比较冻干前后富血小板纤维蛋白形态结构、生长因子活力及释放规律;通过苏木精-伊红染色进行形态学观察;通过CCK8法测定细胞增殖;通过细胞划痕实验评价对细胞迁移能力的影响;通过ELISA试剂盒检测不同时点两组析出液中血小板衍生生长因子BB含量.结果与结论:①苏木精-伊红染色显示,冻干富血小板纤维蛋白结构呈疏松呈海绵状,孔隙直径较大,蓝染有核细胞数目明显减少;②与无血清基础培养基相比,第1天和第7天收集的新鲜及冻干富血小板纤维蛋白析出液明显促进成纤维细胞增殖(P<0.05),其中冻干富血小板纤维蛋白析出液对成纤维细胞增殖能力效果更显著(P<0.05);③与无血清培养基相比,新鲜、冻干富血小板纤维蛋白析出液及含10％胎牛血清的完全培养基,在12 h及24 h两个时间点均能有效促进成纤维细胞迁移,差异有显著性意义(P<0.05);④与新鲜富血小板纤维蛋白析出液相比,冻干富血小板纤维蛋白析出液在12 h及24 h两个时间点促进成纤维细胞的迁移作用更明显(P<0.05),差异有显著性意义(P<0.05);⑤新鲜富血小板纤维蛋白组血小板衍生生长因子BB在第7天释放量最大,随着时间推移,生长因子释放量逐渐减少;冻干富血小板纤维蛋白组血小板衍生生长因子BB在第1天释放量最大,随着时间推移生长因子释放量逐渐减少,差异有显著性意义(P<0.05);两组生长因子释放总量进行比较,差异无显著性意义(P>0.05);⑥结果表明,冻干技术保存富血小板纤维蛋白具有可行性,可以为组织修复重建提供理论依据.