miR-30b在高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化中的作用

目的:观察微小RNA-30b(miR-30b)在高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化中的作用及其机制.方法:将SD大鼠随机分为假手术(sham)组和慢性肾衰竭所致血管钙化(CRF+VC)组.采用硝酸银染色检测血管钙化情况;免疫组织化学法检测成骨转录因子Runx2的表达.体外培养原代大鼠胸主动脉VSMCs并分为正常组和高磷组.采用邻甲酚酞络合酮比色法及茜素红染色检测VSMCs的钙化情况;ELISA法测定VSMCs中碱性磷酸酶(ALP)活性;RT-qPCR测定VSMCs中miR-30b及Runx2 mRNA的表达;Western blot检测Runx2蛋白的表达.为进一步验证miR-30b对VSMCs的作用,转染miR-30b模拟物(mimic-30b),检测VSMCs钙化、Runx2表达和ALP活性的变化.结果:与sham组比较,CRF+VC组大鼠胸主动脉钙盐沉积和Runx2表达均显著增加(P<0.05);相关分析显示,Runx2与血管钙化呈正相关(r=0.971,P<0.05).与正常组比较,高磷诱导的大鼠VSMCs钙化增加(P<0.05),Runx2表达及ALP活性均显著升高(P<0.05),而miR-30b水平显著降低(P<0.05).转染mimic-30b后,miR-30b的表达显著升高(P<0.05),VSMCs钙化程度、Runx2表达及ALP活性均显著降低(P<0.05).结论:高磷可诱导大鼠VSMCs钙化,可能是通过抑制miR-30b表达、促进细胞表型转化实现的.