转录因子EB通过激活自噬及溶酶体功能改善缺血性卒中小鼠神经功能

目的:观察外源性导入转录因子EB(TFEB)对缺血性脑卒中小鼠神经功能损伤的影响.方法:(1)15只10周龄雄性C57BL/6小鼠用于建立永久性大脑中动脉阻塞(pMCAO)模型,随机分为假手术组、梗阻2 h组、梗阻4 h组、梗阻8 h组和梗阻24 h组,每组3只,Western blot法检测pMCAO后皮层神经元TFEB、溶酶体相关膜蛋白1(LAMP-1)、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)和cleaved caspase-3蛋白的表达;(2)45只8周龄雄性C57BL/6小鼠分为假手术组、TFEB过表达组、过表达对照组、TFEB敲减组和敲减对照组,每组9只.除假手术组外,其余4组小鼠均经侧脑室注射9型腺相关病毒(AAV9),分别为AAV9-TFEB、AAV9-NC、AAV9-shTFEB和AAV9-shNC,注射2周后建立pMCAO模型,24 h后采用Longa评分法评估小鼠神经功能,磁共振法检测并计算脑梗死体积,TUNEL染色检测皮层神经元细胞凋亡情况,尼氏染色观察皮层神经元细胞形态及数量,Western blot法检测皮层神经元TFEB、LAMP-1、LC3B、cleaved caspase-3蛋白的表达.结果:与假手术组相比,pMCAO后2～24 h,皮层神经元TFEB、LAMP-1及LC3B-II蛋白表达水平均显著下降,而cleaved caspase-3表达升高(P<0.05).侧脑室注射AAV9-TFEB可改善pMACO后小鼠Longa评分,而注射AAV9-shTFEB则恶化Longa评分(P<0.05).磁共振结果显示侧脑室注射AAV9-TFEB可减少脑梗死体积,而注射AAV9-shTFEB则增加脑梗死体积(P<0.05).尼氏染色显示AAV9-TFEB组小鼠皮层神经元细胞数量显著多于AAV9-NC组,AAV9-shTFEB组小鼠皮层神经元细胞数量则显著少于AAV9-shNC组(P<0.05).Western blot结果显示过表达TFEB可增加皮层脑组织LAMP-1和LC3B-II表达,降低cleaved caspase-3表达(P<0.05);敲减TFEB则降低皮层脑组织LAMP-1和LC3B-II表达,增加cleaved caspase-3表达(P<0.05).结论:利用AAV9外源性导入TFEB可通过激活自噬及溶酶体功能而减少pMCAO后皮层神经元细胞凋亡,改善小鼠神经功能.