miR-30e-5p通过靶向ATG5基因调控肝癌细胞增殖、凋亡及自噬

为探讨miR-30e-5p对人肝癌细胞增殖、凋亡及自噬的影响及其潜在的分子机制,为肝癌的诊断和治疗提供新的靶点,采用qRT-PCR检测人正常肝细胞HL-7702及人肝癌细胞MHCC97H、Huh7、HCCLM3中miR-30e-5p的表达量,采用脂质体转染技术将miR-30e-5p mimics转染至MHCC97H细胞,用qRT-PCR检测转染效果,MTT法、克隆形成试验、FACS和Western blotting分别检测过表达miR-30e-5p对MHCC97H细胞增殖、凋亡和自噬的影响,双荧光素酶报告基因试验和Western blotting验证miR-30e-5p与自噬相关基因5(autophagy-related gene 5,ATG5)基因的靶向关系.结果显示,与人正常肝细胞HL-7702相比,人肝癌细胞MHCC97H、Huh7和HCCLM3中miR-30e-5p表达水平明显降低(P＜0.05),且在MHCC97H细胞中表达水平最低.过表达miR-30e-5p能够抑制MHCC97H细胞的增殖和克隆形成(P＜0.05),促进MHCC97H细胞凋亡(P＜0.05),抑制MHCC97H细胞自噬(P＜0.05).miR-30e-5p可明显抑制ATG5 3'非翻译区(untrans-lated region,UTR)的相对荧光素酶活性(P＜0.05).过表达miR-30e-5p能够明显抑制MHCC97H细胞中ATG5 mRNA和蛋白表达(P＜0.05).该研究提示,过表达miR-30e-5p能够抑制人肝癌细胞MHCC97H的增殖和自噬,促进细胞凋亡,其作用机制可能与miR-30e-5p靶向抑制ATG5基因表达有关.