当归多糖对人白血病干细胞体外增殖与体内移植模型的影响

目的 探讨当归多糖(ASP)对人白血病干细胞(LSCs)增殖及体内移植的影响.方法 1.ASP 对CD34+CD38-人LSCs体外增殖的影响.免疫磁性法分选正常人和髓系白血病患者骨髓中CD34+CD38-细胞,分为正常CD34+CD38-对照组、CD34+CD38-LSCs对照组、正常CD34+CD38-ASP组和CD34+CD38-LSCs ASP组,后两组在常规培养基础上加入ASP(终浓度40 mg/L).流式细胞术检测CD34+CD38-细胞纯度;锥虫蓝染色检测细胞存活率;细胞计数试剂盒8(CCK-8)和混合集落形成单位(CFU-Mix)检测CD34+CD38-LSCs增殖分化能力;RT-PCR检测衰老相关基因表达水平.2.ASP对人LSCs移植小鼠模型的影响.体内移植LSCs建立CD34+CD38-LSCs 小鼠移植模型,随机分为ASP移植模型组[腹腔注射ASP,200 mg/kg,(1次/d)x14 d]和移植模型组(注射等时、等量生理盐水).药物注射完成第2天,计数白细胞总数和分类计数,观察血细胞形态;免疫荧光细胞化学法检测受体鼠骨髓中CD34+CD38-LSCs;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测染色阳性骨髓单核细胞(BMMCs)百分率;流式细胞术检测BMMCs细胞周期分布;CFU-Mix培养检测BMMCs集落形成能力.结果 分选后CD34+CD38-细胞纯度达到(91.14±1.02)％,细胞存活率为(95.42±3.5)％;CD34+CD38-LSCs对照组细胞增殖与集落形成能力显著高于正常CD34+CD38-对照组;CD34+CD38-LSCs ASP组细胞增殖能力与集落形成能力明显低于CD34+CD38-LSCs对照组;CD34+CD38-LSCs ASP组细胞高表达p16INK4a、p19Arf、p53、p21Cipl/Wafl基因.移植CD34+CD38-LSCs 后小鼠骨髓中存在人源性LSCs.移植模型组小鼠白细胞总数增加,中性粒细胞比例升高,淋巴细胞比例降低;注射ASP可明显降低白细胞总数和中性粒细胞比例,淋巴细胞比例有所升高;处于G0/G1期中的BMMCs数量增加,S期细胞数量减少;SA-β-Gal染色阳性细胞百分率明显提高;CFU-Mix集落形成数显著减少.结论 ASP在体内与体外均能抑制CD34+CD38-LSCs增殖,推测其可能机制与ASP调节细胞衰老相关基因表达密切相关.