二乙基亚硝胺诱导小鼠肝纤维化动态模型的建立及病理机制初探

目的 为探究肝纤维化的发生发展机制及病理病因的特点,本研究通过建立二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)诱导的肝纤维化动态小鼠模型,动态监测上述小鼠模型的血清生化指标,推断肝纤维化阶段.方法 雄性C57BL/6小鼠按梯度剂量每周2次腹腔注射DEN,连续8周.分别在第2、4、6和8周收集小鼠的血清和肝组织,通过检测相应血清生化指标、肝组织羟脯氨酸含量以及组织病理学检查监测和评估小鼠肝纤维化的发病进程.采用Western blot检测TGF-β1、α-SMA和TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白以探究肝纤维化的发病机制.结果 从第4周开始,与对照组相比,DEN诱导小鼠的肝功能相关血清生化指标(AST、ALT、ALP、T-BIL、A/G等)出现显著变化,且体质量出现明显下降.肝脏指数出现明显下降,组织中羟脯氨酸含量均显著升高(P<0.01),组织病理学结果显示DEN诱导组小鼠肝组织开始出现轻微胶原沉积.Western blot结果表明模型组小鼠肝组织中TGF-β1和 α-SMA表达显著上调,TLR4、MyD88、TRAF6及细胞核NF-κB p65蛋白表达水平显著升高,细胞质p65 NF-κB表达显著下调.结论 研究结果表明,肝纤维化的发生机制与肝损伤后激活TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关,而TLR4炎症通路的激活又进一步促进分泌TGF-β1并激活肝星状细胞从而导致大量细胞外基质沉积.本研究表明,通过DEN诱导的小鼠肝纤维化发病机制可能与炎症相关,且可通过结合多个血清生化指标初步判断肝纤维化阶段.