人微小病毒B19荧光定量聚合酶链式反应检测方法的建立

目的 建立可同时检测各型人微小病毒B19 (HPV B19)的荧光定量聚合酶链式反应(pCR)方法.方法 运用在线工具MAFFT比对分析3种基因型的HPV B19代表病毒株NS1区域序列,针对保守区序列设计特异性的引物和探针.建立检测HPV B19实时荧光定量PCR方法,并对该方法的敏感性和特异性进行评估.结果 1×107～l×102拷贝/μL以及20拷贝/μL质粒DNA模板绘制的标准曲线,反应效率E为0.946,R2值为0.9966;本方法的检测下限为10拷贝/μL,定量下限为20拷贝/μL.单纯疱疹病毒(HSV)2型、巨细胞病毒(CMV)、B族链球菌(GBS)、乙型肝炎病毒(HBV)、EB病毒(EBV)的阳性DNA病毒检测结果均为阴性,参考质粒及HPV B19阳性样本正常扩增.结论 建立的荧光定量PCR检测方法具有较好的敏感性和特异性,可运用于HPV B19感染的筛查和诊断.