低温压力下斑马鱼ZF4细胞中dnmt1的作用研究

目的 探究低温压力下DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)的作用.方法 以斑马鱼胚胎成纤维样细胞(zebrafish embryonic fibroblast like cell line,ZF4)为研究对象,检测ZF4细胞低温下dnmt1的表达变化,并构建靶向dnmt1的shRNA通过慢病毒在ZF4细胞中敲低dnmt1,进一步检测敲低dnmt1对于低温下ZF4细胞全基因组DNA甲基化、细胞存活率和凋亡相关基因表达的影响.结果 18℃低温压力下ZF4细胞中dnmt1的mRNA表达量升高,在处理第3天达到顶峰.sh-dnmt1慢病毒可以有效下调ZF4细胞中dnmt1的表达.低温压力下,ELISA结果显示dnmt1敲低后细胞全基因组DNA甲基化水平显著下调(P<0.05),台盼蓝染色显示细胞存活率显著升高(P<0.001),RT-qPCR结果显示凋亡相关基因bax表达量显著下调(P<0.001)、bcl-2表达量显著上调(P<0.001)、caspase-3表达量显著下调(P<0.01).结论 低温压力下敲低dnmt1对ZF4细胞具有保护作用,而且DNA甲基化水平降低、细胞凋亡受到抑制可能与其保护作用相关,研究结果可为后期研究人类低温耐受的分子机制提供新线索.