结核分枝杆菌介导TWIK2-NLRP3通路参与小鼠肺泡巨噬细胞损伤的研究

目的 分析结核分枝杆菌(MTB )介导TWIK2 - NLRP3通路参与小鼠肺泡巨噬细胞损伤.方法 将40只昆明小鼠按照随机数字表法分为卡介苗组和H37Rv组,每组20只.2组分别经尾静脉给予一次性注射MTB活菌卡介苗和H37Rv菌悬液制备小鼠感染模型,剂量均0.3 mL.2组小鼠于感染后1、3、7、14 d脱颈处死,采用磷酸盐缓冲液对气管、肺泡进行灌洗,收集的感染小鼠肺泡巨噬细胞以激光共聚焦显微镜技术、MTT、流式细胞术、酶联免疫吸附实验(ELISA )、实时聚合酶链式反应(RT-PCR)及蛋白质印迹(Western blotting )等技术对2组小鼠不同时间点巨噬细胞的吞噬能力、凋亡率、乳酸脱氢酶(LDH)表达量、炎性因子含量、K+浓度、钾离子通道蛋白(TWIK2)、炎症小体(NLRP3 )及凋亡相关斑点样蛋白(ASC )的mRNA和蛋白表达量进行检测、对比.结果 感染后1、3、7、14 d,2组小鼠肺泡巨噬细胞吞噬菌种的量、凋亡率以及LDH表达量均随时间显著增加,K+浓度则随时间显著降低,且均在在感染后7d达到最高或最低.感染7d后,与卡介苗组相比,H37Rv组小鼠中TWIK2、NLRP3及ASC mRNA和蛋白的相对表达量以及炎性因子白细胞介素-lβ( IL-1β)、白细胞介素-18( IL-18 )和肿瘤坏死因子-a( TNF-a)含量均显著升高,差异有统计学意义(P ＜0.05 ).结论 MTB和卡介苗菌株均介导TWIK2-NLRP3通路参与小鼠肺泡巨噬细胞损伤.小鼠体内注入适量MTB可被肺泡巨噬细胞吞噬,MTB可促进肺泡巨噬细胞的凋亡与损伤,其作用机制可能与TWIK2的激活密切相关..