自建微阵列化学发光免疫分析法定量检测心肌肌钙蛋白I自身抗体及其初步临床应用

目的 基于微阵列蛋白质芯片技术建立定量检测心肌肌钙蛋白I自身抗体(cTnIAAb)的微阵列化学发光免疫分析法,并评价该方法 的检测性能.方法 以心肌肌钙蛋白I(cTnI)-C融合蛋白为检测抗原,对抗原点样浓度、封闭液、封闭时间和二抗进行筛选,以检测结果 信噪比最大为标准优化条件.以100名健康体检者(正常对照组)cTnIAAb检测灰度值的第95百分位数为临界值,建立cTnIAAb检测的标准曲线,并评价微阵列化学发光免疫分析法的检测性能(稳定性、精密度、最低检测限、线性范围等).采用微阵列化学发光免疫分析法检测500例血清cTnI>0.1 ng/mL的急性冠状动脉综合征(ACS)患者(ACS组)的血清cTnIAAb,采用免疫印迹法验证其特异性.结果 最优实验条件:抗原点样浓度为50μg/mL,封闭液为2％人乳,最佳封闭时间为12 h,二抗为辣根过氧化物酶(HRP)-羊抗人IgG抗体.微阵列化学发光免疫分析法检测高、低值cTnIAAb的精密度良好,变异系数(CV)均<15％;空白限(LoB)、检测限(LoD)分别为0.12、0.23 AU/mL;线性范围为0.23～815.00 AU/mL.免疫印迹法结果 显示,cTnIAAb阳性样本和阳性对照在相对分子质量40000～55000处均出现特异性条带.ACS组血清cTnIAAb阳性率为8.4％(42/500),明显高于正常对照组[2％(2/100)](χ2=5.023,P<0.05);但血清cTnIAAb浓度2个组之间差异无统计学意义(P>0.05).Spearman相关性分析结果 显示,ACS组cTnIAAb与cTnI无相关性(r2=0.1,P>0.05).结论 自建的定量检测cTnIAAb的微阵列化学发光免疫分析法具有良好的检测性能,可为cTnIAAb的临床应用提供较好的方法 学基础.