结肠癌来源外泌体对自然杀伤细胞miR-18a和NKG2D表达的影响

目的 基于miR-18a/NKG2D探究结肠癌来源外泌体(CDEs)对自然杀伤(NK)细胞杀伤作用的影响.方法 取人结肠癌SW480细胞培养后收集CDEs并进行鉴定;从健康志愿者外周血中分离NK细胞并采用IL-2刺激其增殖,流式细胞仪进行鉴定;将CDEs与NK细胞共培养后采用CCK-8法检测NK细胞活力;流式细胞术分析CD107a表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)和干扰素γ(IFN-γ)的表达,评估NK细胞对SW480细胞的杀伤功能;流式细胞术测定NK细胞表面NKG2D受体表达水平;实时荧光定量PCR(qPCR)检测NK细胞中miR-18a的表达.结果 电子透射显微镜下CDEs呈圆盘状、双层膜囊泡状结构,Western blotting可检测到外泌体阳性标志蛋白CD63、CD81的表达;IL-2刺激后CD3-、CD56+的NK细胞比例显著增加(P<0.05);CDEs并未明显影响NK细胞生长活力(P=0.999),与阴性对照组相比,经CDEs干预的NK细胞CD107a表达、TNF-α、IFN-γ、NKG2D受体表达水平明显降低(P<0.05),miR-18a表达明显增加(P<0.05),且呈一定的浓度依赖性.结论 CDEs可能通过上调miR-18a的表达、下调NKG2D表达,抑制NK细胞的杀伤作用来介导结肠癌细胞的免疫逃逸.