LINC00052靶向miR-145发挥对TNF-α诱导人关节软骨细胞损伤的保护作用

目的 明确长链非编码RNA (long non-coding RNA,lncRNA)LINC00052在肿瘤坏死因子α(tumor necro-sis factorα,TNF-α)诱导人关节软骨细胞损伤中的作用,并阐明其对miR-145的调控机制.方法 利用0、10及30 ng/mL TNF-α诱导建立人C-20/A4关节软骨细胞损伤模型.采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real time quantita-tive polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测LINC00052与miR-145的表达及二者的相关性.通过特异性短发夹RNA干扰C-20/A4细胞中LINC00052的表达,采用四唑盐比色法[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazo-lium bromide,MTT]检测细胞增殖能力.采用蛋白质印迹检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase 3,CASP3)、cleaved CASP3、Bcl-2相关X(Bcl-2 associated X,BAX)蛋白的表达水平.采用酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测炎症因子白介素(interleukin,IL)-1β、IL-6及IL-13的浓度.采用双荧光素酶报告基因实验分析LINC00052对miR-145的直接调控作用.采用拯救实验验证LINC00052靶向miR-145在TNF-α诱导C-20/A4细胞损伤中的作用.采用t检验与方差分析进行统计比较.结果 LINC00052在0、10及30 ng/mL TNF-α诱导C-20/A4细胞中的表达水平呈上调趋势,而miR-145呈下调趋势,二者表达水平呈负相关(P＜0.05).干扰LINC00052降低TNF-α诱导C-20/A4细胞增殖能力,增加CASP3、cleaved CASP3及BAX的蛋白表达水平,并提高IL-1β、IL-6及IL-13的浓度(P＜005).miR-145是LINC00052的直接靶基因,干扰LINC00052上调C-20/A4细胞中miR-145的表达水平(P＜0.05).干扰miR-145部分逆转LINC00052抑制对TNF-α诱导C-20/A4细胞增殖、凋亡及炎症反应的影响(P＜0.05).结论 LINC00052靶向miR-145发挥对TNF-α诱导人关节软骨细胞损伤的保护作用,其机制可能与促进增殖并抑制凋亡与炎症反应有关.