PERK途径内质网应激与右美托咪定减轻小鼠脑缺血再灌注损伤的关系

目的:从在体和细胞水平评价蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)途径内质网应激与右美托咪定减轻小鼠脑缺血再灌注损伤的关系。方法:在体实验 健康清洁级雄性小鼠20只，体重20～30 g，6～8周龄，采用随机数字表法将小鼠分为4组( n＝5)：假手术组(S组)、假手术+右美托咪定组(SD组)、脑缺血再灌注组(IR组)和脑缺血再灌注+右美托咪定组(IRD组)。采用改良二血管阻断联合低血压法制备脑缺血再灌注损伤模型。IRD组于缺血10 min时、SD组于相应时点腹腔注射右美托咪定25 μg/kg。再灌注1 h时采用改良神经系统损伤程度法进行行为学评分，随后处死大鼠，取脑组织，采用Western blot法测定内质网应激蛋白：免疫球蛋白重链结合蛋白(BIP)、真核起始因子2α(EIF-2α)、p-EIF-2α、PERK、p-PERK的表达。细胞实验 选取标准小鼠海马神经元细胞系，采用随机数字表法分为4组( n＝12)：对照组(C组)、糖氧剥夺/复氧复糖组(OGD/R组)、糖氧剥夺/复氧复糖+右美托咪定组(OGD/R+D组)、糖氧剥夺/复氧复糖+PERK途径抑制剂ISRIB组(OGD/R+ISRIB组)。糖氧剥夺/复氧复糖模型的制备：使用低糖培养基在94%N 2-5%CO 2-1%O 2混合气体孵育6 h，然后复氧复糖。于糖氧剥夺前30 min，OGD/R+D组加入终浓度5 mmol/L的右美托咪定，OGD/R+ISRIB组中加入终浓度10 mmol/L的ISRIB。复氧复糖12 h时，采用CCK-8法检测细胞存活率，复氧复糖24 h时，采用Western blot法测定内质网应激蛋白的表达。 结果:在体实验 与S组比较，IR组行为学评分升高，脑组织BIP、p-EIF-2α、p-PERK表达上调( P<0.05)。与IR组比较，IRD组行为学评分降低，脑组织BIP、p-EIF-2α、p-PERK表达下调( P<0.05)。细胞实验 与C组比较，OGD/R组BIP、p-EIF-2α、PERK与p-PERK表达上调，细胞存活率下降( P<0.05)；与OGD/R组比较，OGD/R+D组、OGD/R+ISRIB组BIP、p-EIF-2α与p-PERK表达下调，细胞存活率升高( P<0.05)；与OGD/R+ISRIB组比较，OGD/R+D组PERK表达下调( P<0.05)，其余指标差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:右美托咪定减轻小鼠脑缺血再灌注损伤的机制可能与抑制PERK途径内质网应激有关。