MicroRNA-29a调控心房颤动模型大鼠心房肌细胞凋亡的机制研究

目的 研究microRNA-29a(miR-29a)对心房颤动(房颤)模型大鼠心房肌细胞凋亡的调控作用并探讨可能存在的作用机制.方法 对20只SD大鼠采用乙酞胆碱-氯化钙(ACH-CaCl2)混合液尾静脉注射法连续给药4周制作房颤动物模型(模型组),并正常饲养5只大鼠作为对照组.4周后,心电图示模型组为典型房颤心电图则表示大鼠房颤造模成功.而后将两组大鼠处死,提取和分离大鼠的原代心房肌细胞并分为5组:①阴性对照组:对照组大鼠的原代心房肌细胞,不加任何药物处理;②模型组:模型组大鼠的原代心房肌细胞,不加任何药物处理;③miR-29a inhibitor(miR-29a抑制剂)组:模型组大鼠的原代心房肌细胞,转染终浓度为50 nmol/L的miR-29a inhibitor;④SP600125(JNK抑制剂)组:模型组大鼠的原代心房肌细胞加入20 mmol/L的SP600125;⑤SP600125+miR-29a inhibitor组:模型组大鼠的原代心房肌细胞转染50 nmol/L的miR-29a inhibitor,并加入20 mmol/L的SP600125.5组细胞均置于37℃,5％二氧化碳恒温培养箱中培养48 h.采用MTT法检测miR-29a inhibitor及SP600125对房颤大鼠心房肌细胞活力的影响;采用Annexin-Ⅴ/PI染色检测各组心房肌细胞凋亡情况;Western blot检测各组细胞中Bcl-2、Bax、p-JNK蛋白的表达情况.结果 与阴性对照组相比,模型组细胞凋亡明显上升,细胞活力明显下降;与模型组相比,miR-29a inhibitor组、SP600125组细胞凋亡明显下降、细胞活力明显上升.与阴性对照组相比,模型组的Bcl-2蛋白的表达显著下降,Bax蛋白的表达显著升高;与模型组相比,miR-29a inhibitor组、SP600125组的Bcl-2蛋白的表达显著升高,而Bax蛋白的表达显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05).与阴性对照组相比,模型组p-JNK表达显著上升,与模型组相比,miR-29a inhibitor组、SP600125组和SP600125+miR-29a inhibitor组的心房肌细胞p-JNK蛋白的表达均明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 阻断miR-29a可抑制房颤模型大鼠心房肌细胞的凋亡,其机制可能是通过抑制JNK信号通路来实现.