细胞融合促进诱导多能干细胞向心肌细胞分化的效率

目的 体外研究诱导多能干细胞(iPSCs)与心肌细胞的杂交细胞的心肌细胞分化效率.方法 聚乙二醇体外介导iPSCs与心肌细胞融合;检测杂交细胞染色体数;RT-PCR检测干细胞及心肌细胞特异性基因在杂交细胞中表达情况;细胞免疫荧光法检测干细胞及心肌细胞特异性蛋白在杂交细胞中表达情况;采用悬浮培养法制备拟胚体(EBs),检测杂交细胞和iPSCs的心肌细胞分化效率.结果 杂交细胞具有近似四倍体核型;RT-PCR提示杂交细胞中Oct-4的表达与iPSCs没有统计学差异(P>0.05),P1代杂交细胞中Nanog的表达低于iPSCs(P<0.05),α-MHC和β-MHC在iPSCs、P3、P5、P7代杂交细胞中的表达明显低于心肌细胞(P<0.05);细胞免疫荧光提示Oct-4在杂交细胞中呈阳性表达,在心肌细胞中呈阴性表达,cTnT在心肌细胞中阳性表达,在早期杂交细胞中呈阳性表达,P3代以后的杂交细胞呈阴性表达;杂交细胞和iPSCs均能够形成搏动的EBs;杂交细胞在第20 d、25 d及30 d时的搏动率明显高于iPSCs(P<0.05).结论 聚乙二醇能够在体外介导iPSCs与心肌细胞融合,杂交细胞的心肌细胞分化效率高于iPSCs.