核酸质谱检测结核分枝杆菌耐药方法的建立

目的 建立核酸飞行质谱(MassARRAY)方法 检测结核耐药基因突变检测体系,并评估其检测临床耐药结核病的应用价值.方法 收集2016年1月-2019年6日上海市嘉定区中心医院肺科肺结核有治疗经历患者的菌培养样本55例,其中药物敏感样本10例,45例耐多药样本中,耐异烟肼、耐氟喹诺酮类(左氧氟沙星、莫西沙星)的样本45例、耐二线类注射药物(阿米卡星、卷曲霉素)的样本23例;供试样本均提取核酸,先用一代测序验证质谱检测的准确性,再根据临床药敏试验结果 ,验证质谱检测复治样本的有效性,主要评价指标为检测的灵敏度、特异性和一致性.结果 与一代测序相比,该体系检测临床菌株异烟肼、氟喹诺酮类药物和二线注射类药物的灵敏度分别为100％(37/37)、100％(34/34)和100％(10/10),特异性分别为100％(18/18)、100％(21/21)和100％(45/45),总一致率100％,一致性检验Kappa值为1.以最低抑菌浓度法(MIC)为金标准,该体系检测临床菌株异烟肼、氟喹诺酮类药物和二线注射类药物的灵敏度分别为82.2％(37/45)、75.6％(34/45)和45.5％(10/22),特异性分别为100％(10/10)、100％(10/10)和100％(33/33),两种方法 的总一致率为89.1％,一致性检验Kappa值为0.703.结论 质谱检测基因突变与最低抑菌浓度法检测结核菌耐药总体具有一定的一致性,可快速检测结核分枝杆菌的耐药性,有望成为复治患者辅助临床治疗的新手段.