小干扰RNA沉默甲胎蛋白基因对HepG2细胞迁移及侵袭的影响

目的 研究甲胎蛋白(AFP)对肝癌HepG2细胞迁移和侵袭能力的影响及其机制.方法 应用合成的靶向沉默AFP小干扰RNA(siRNA)转染肝癌HepG2细胞,分为空白对照、阴性对照组及AFP siRNA组,各组细胞干预48 h后,采用实时定量PCR(qRT-PCR)和ELISA法检测细胞转染后的沉默效率,Transwell小室实验检测沉默AFP基因后HepG2细胞的侵袭、迁移能力,用Western blotting法观察沉默AFP基因的表达对上皮-间质转化(EMT)相关蛋白(N-cadherin、Vimentin和E-cadherin)、AKT和p-AKT蛋白表达的影响.计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验.结果 转染沉默后,与空白对照组相比,AFP siRNA组中AFP mRNA的相对表达量明显降低(P<0.01),抑制率达86.440％,同时AFP siR-NA组细胞上清液中AFP蛋白表达水平同样明显降低(P<0.01).与空白对照组相比,AFP siRNA组的迁移细胞数和侵袭细胞数显著下降,差异具有统计学意义(P值均<0.01).沉默HepG2细胞中AFP基因的表达后,与空白对照组比较,AFP siRNA组EMT相关蛋白E-cadherin蛋白的表达水平升高(P<0.01),而N-cadherin及Vimentin表达水平均明显降低(P值均<0.05),且PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-AKT的表达水平明显降低(P<0.01).结论 沉默AFP可抑制肝癌细胞转移,基于HepG2细胞株的机制研究可能与阻断PI3K/Akt通路抑制EMT相关.