小干扰RNA靶向干扰共刺激分子B7-H4抑制膀胱癌细胞增殖、侵袭及上皮-间充质转化

目的:观察小干扰RNA(siRNA)靶向干扰共刺激分子B7-H4基因对膀胱尿路上皮癌细胞增殖、侵袭、凋亡以及上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法:反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测膀胱癌BIU-87细胞和膀胱正常上皮SV-HUV-1细胞的B7-H4的表达；将B7-H4-siRNA脂质体转染BIU-87细胞，Western blot检测siRNA干扰B7-H4表达对膀胱癌BIU-87细胞B7-H4表达水平和EMT的影响，细胞计数试剂盒(CCK-8)法、Transwell侵袭试验和流式细胞术检测干扰B7-H4表达对膀胱癌BIU-87细胞增殖、侵袭和凋亡的影响；构建慢病毒B7-H4基因过表达载体并转染BIU-87细胞，上述实验方法检测B7-H4的表达水平、恶性生物学行为和EMT转化的变化。以上均以未干扰BIU-87细胞为对照组。两组均数比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:BIU-87细胞B7-H4 mRNA表达量(19.501±1.753)高于SV-HUV-1细胞(1.008±0.078， t＝15.613， P<0.01)，差异有统计学意义；B7-H4蛋白在BIU-87细胞量(12.309±2.561)表达高于SV-HUV-1细胞(2.463±0.136， t＝8.541， P<0.01)，差异有统计学意义。B7-H4-siRNA敲低后BIU-87细胞B7-H4和N-钙黏蛋白(N-cadherin)的表达量低于未敲低组，而E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达量则高于未敲低组。B7-H4-siRNA干扰BIU-87细胞72 h后B7-H4敲低组1、2和3组对应吸光度值分别为1.714±0.075、1.762±0.092和1.796±0.072，显著低于未敲低组(2.262±0.155， F＝6.017， P<0.01)，差异有统计学意义；成功将B7-H4过表达质粒转染BIU-87细胞后可以明显观察到过表达条带，且72 h后B7-H4过表达组吸光度值(2.858±0.147)显著高于对照组(2.353±0.209， t＝8.395， P<0.01)，差异有统计学意义；B7-H4-siRNA敲低后BIU-87细胞主要处于G 1期，细胞分裂周期延长，B7-H4过表达后BIU-87细胞主要处于S期，细胞分裂周期缩短，且BIU-87细胞凋亡数量[(6.037±0.153)个]显著高于过表达组[(3.646±0.065)个， t＝10.238， P<0.01]，差异有统计学意义；Transwell侵袭实验结果显示对照组细胞数量[(172.000±9.091)个]明显高于B7-H4敲低组1[(47.000±4.535)个、组2(41.000±8.643)个和组3(48.000±11.058)个， F＝13.742， P<0.01]，差异有统计学意义；当BIU-87细胞转染B7-H4过表达质粒后，B7-H4过表达组BIU-87细胞侵袭能力(338.672±10.663)明显高于对照组(43.732±6.847， F＝15.542， P<0.01)；BIU-87细胞转染B7-H4过表达质粒后，N-cadherin表达量(1.876±0.212)明显高于对照组(0.375±0.072， F＝8.436， P<0.01)，而E-cadherin的表达量(0.287±0.064)明显少于对照组(2.267±0.118， F＝9.785， P<0.01)。 结论:siRNA靶向干扰B7-H4后抑制膀胱尿路上皮癌细胞增殖、侵袭及EMT。