miR-224在骨髓间充质干细胞成骨分化过程中的作用机制

目的 探讨miR-224对骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化的影响及其机制.方法 体外以成骨诱导培养基培养hBMSCs,采用Western印迹法和碱性磷酸酶(ALP)活性测定试剂盒检测成功分化标志物骨钙素(OCN)、成骨特异性转录因子(Runx)2蛋白和ALP活性.采用脂质体2000转染miR-224 mimics和Smad4 siRNA干扰序列分别上调miR-224和下调Smad4表达,以实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western印迹法检测miR-224和Smad4表达情况,采用荧光素酶报告基因实验检验miR-224与Smad4的靶向关系.结果 随hBMSCs诱导分化时间的延长,miR-224表达降低,而Smad4表达升高.上调miR-224后,成骨分化相关指标ALP活性、OCN和Runx2蛋白表达减弱,Smad4蛋白表达下降;荧光素酶实验证实Smad4是miR-224的靶基因,下调其表达后,成骨分化相关指标ALP活性、OCN和Runx2蛋白表达减弱.结论 miR-224可通过靶向Smad4抑制hBMSCs成骨分化.