JNK/MAPK通路在结核杆菌感染的巨噬细胞凋亡、自噬中的作用机制研究

目的 探讨c-Jun N端激酶(JNK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路在结核杆菌感染的巨噬细胞凋亡、自噬中的作用机制研究.方法 体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞建立卡介苗结核分枝杆菌(BCG)细胞感染模型,将BCG感染的RAW264.7细胞使用JNK抑制剂SP600125处理,将细胞随机分为对照组、BCG组、对照+SP600125组、BCG+ SP600125组;PCR法检测Bax、Bcl-2、caspase-3表达情况;吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)染色检测各组细胞自噬情况;噻唑蓝法(MTT法)检测各组细胞存活率变化情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;蛋白印迹分析法检测各组细胞JNK、p-JNK、LC3、Beclin-1、P62蛋白表达变化.结果 与对照组相比,BCG组RAW264.7细胞中JNK蛋白及磷酸化表达水平、细胞自噬水平、凋亡率、Bax、caspase-3 mRNA表达水平、LC3、Beclin-1蛋白表达水平显著升高,细胞存活率、Bcl-2 mRNA表达水平、P62蛋白表达水平显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与BCG组相比,BCG+ SP600125组JNK蛋白及磷酸化表达水平、细胞自噬水平、凋亡率、Bax、caspase-3 mRNA表达水平及LC3、Beclin-1蛋白表达水平显著降低,细胞存活率、Bcl-2 mRNA表达水平、P62蛋白表达水平显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 结核杆菌感染可抑制巨噬细胞增殖、诱导巨噬细胞凋亡与自噬,可能与激活JNK/MAPK通路有关.