多房棘球蚴亮氨酸氨基肽酶优势抗原表位的鉴定

目的 根据预测多房棘球蚴亮氨酸氨基肽酶(Leucine aminopeptidase,LAP)抗原表位的结果,进一步鉴定其优势的T细胞和B细胞抗原表位.方法 构建重组质粒pCzn1-LAP后进行蛋白原核表达与纯化,将纯化的LAP蛋白进行动物免疫后,利用脾脏淋巴细胞增殖、流式细胞术、ELISA pot、ELISA等方法鉴定优势抗原表位.最后,利用SWISS-MODEL软件对LAP蛋白3D结构建模,PyMOL软件对鉴定的LAP优势抗原表位分布进行准确定位.结果 pCzn1-LAP菌株诱导表达的蛋白约为57 kDa,蛋白经过复性后成功纯化.流式细胞术鉴定的Th1型优势抗原表位为LAP79-63、LAP396-410和LAP106-120;Th2型优势抗原表位为LAP13-28、LAP495-510和LAP396-410.ELISA pot鉴定的Th1型优势抗原表位为LAP396-410、LAP504-518和LAP106-120;Th2型优势抗原表位为LAP504-518、LAP313-328和LAP396-410.BALB/c小鼠血清的抗原表位特异性ELISA筛选出的优势B表位结果为LAP464-479、LAP495-510和LAP313-328.LAP蛋白3D结构建模成功,LAP优势抗原表位分布于表面居多.结论 多房棘球蚴LAP蛋白优势T细胞和B细胞抗原表位鉴定成功,使得研制抗多房棘球蚴感染的多价表位疫苗成为可能.