结核分枝杆菌Rv3621c原核表达及免疫功能研究

目的 以结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)H37Rv基因组为模板,构建、纯化及鉴定原核表达质粒pPROEX-Rv3621c,通过人群、小鼠试验进行免疫原性评价.方法 构建重组质粒pPROEX-Rv3621c,并以全血干扰素释放分析技术(Whole-blood IFN-γ release assay,WBIA)检测其能否被安徽省淮南市M.tb感染者T细胞特异性识别.rRv3621c混合佐剂MTM[母牛分枝杆菌(M.vaccae),人工合成海藻糖-6'6,二分枝菌酸(TDB),单磷酰脂质A(MPLA)]免疫小鼠后,检测血清中特异性抗体分泌水平、脾细胞中抗原特异性Th1型细胞因子分泌水平及肺脏细胞因子mRNA表达水平.结果 成功构建重组质粒pPROEX-Rv3621c,并使之诱导表达、纯化和鉴定.在rRv3621c蛋白诱导下,活动性结核(Activetuberculosis,ATB)患者外周血淋巴细胞释放的IFN-γ水平明显较高(t=4.813,P＜0.01),且ATB患者产生的IFN-γ水平高于潜伏性结核(Latent tuberculosis infection,LTBI)人群(t=4.442,P＜0.01).BCG+ Rv3621 c/MTM组小鼠产生的特异性抗体滴度水平明显高于Rv3621c/MTM组(P＜0.01)和BCG组(P＜0.01),Rv3621c/MTM组和BCG+ Rv3621c/MTM组小鼠的IgG2a/IgG1比值大于1,明显高于MTM组和BCG组.BCG+ Rv3621c/MTM组小鼠均分泌高水平IFN-γ、TNF-α和IL-2.Rv3621c/MTM组小鼠肺脏组织中IFN-γ、TNF-α及iNOS表达水平较高.结论 M.tb感染者外周血T细胞可特异性识别rRv3621c蛋白,rRv3621c混合佐剂MTM可以诱导较强烈的抗原特异性Th1型免疫应答.