C6orf120基因敲除对刀豆蛋白A诱导的自身免疫性肝炎大鼠中性粒细胞和巨噬细胞的影响

目的 探讨功能未知基因C6orf120缺失对刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)诱导的自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)大鼠中性粒细胞和巨噬细胞的影响.方法 抽取野生型(wild type,WT)大鼠和C6orf120基因敲除型(C6orf120-/-)大鼠各24只,随机分成未经ConA诱导组、ConA诱导12 h组和ConA诱导24 h组共3组,每组中WT大鼠和C6orf120-/-大鼠各8只.其中ConA诱导12 h组和ConA诱导24 h组大鼠以ConA 35 mg/kg舌下静脉注射建立AIH大鼠模型,于ConA诱导12 h和24 h后分别处死.检测大鼠血浆丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平;采用流式细胞术检测大鼠外周血、肝、脾、肠系膜淋巴结中中性粒细胞和巨噬细胞的比例;采用全自动五分类血球分析仪检测大鼠全血中性粒细胞比例.结果 未经ConA诱导组WT大鼠与C6orf120-/-大鼠血浆ALT[(57.03±16.39)U/L vs(55.82±12.35)U/L]和AST[(99.94±18.56)U/L vs(110.86±21.84)U/L]水平差异无统计学意义(t=0.244、-1.616,P=0.809、0.115).ConA诱导12 h组WT大鼠ALT[(494.27±250.41)U/L vs(206.44±98.66)U/L]和AST[(2043.42±1618.09)U/L vs(777.22±383.95)U/L]水平均显著高于C6orf120-/-大鼠,差异有统计学意义(t=4.445、3.216,P=0.001、0.016).ConA诱导24 h组WT大鼠与C6orf120-/-大鼠血浆ALT[(196.31±76.10)U/L vs(211.63±83.28)U/L]和AST[(892.88.42±354.95)U/L vs(931.44±397.92)U/L]水平差异无统计学意义(t=-0.384、-0.205,P=0.707、0.841).与未经ConA诱导组相比,ConA诱导12 h和24 h组WT大鼠和C6orf120-/-大鼠血浆ALT与AST水平均显著升高(P均≤0.001);与ConA诱导12 h组相比,ConA诱导24 h组WT大鼠血浆ALT与AST水平均显著降低(P均≤0.001),C6orf120-/-大鼠血浆ALT与AST水平差异均无统计学意义(P均>0.05).未经ConA诱导组、ConA诱导12 h组和ConA诱导24 h组C6orf120-/-大鼠全血中性粒细胞百分比均显著高于WT大鼠[未经ConA诱导组:(21.57±3.88)％vs(10.63±3.34)％;ConA诱导12 h组:(69.26±2.36)％vs(55.80±6.34)％;ConA诱导24 h组:(24.57±3.76)％vs(13.09±3.45)％],差异有统计学意义(t=-6.042、-4.136,-5.513,P均≤0.001).未经ConA诱导组C6orf120-/-大鼠外周血[(33.24±9.80)％vs(13.77±5.33)％]和脾脏[(8.96±2.65)％vs(4.32±0.92)％]中性粒细胞比例均显著高于WT大鼠(t=-6.049、-5.941,P均<0.001);肝脏[(20.85±5.74)％vs(19.25±4.93)％]和肠系膜淋巴结[(0.95±0.26)％vs(0.88±0.45)％]中性粒细胞比例差异无统计学意义(t=-0.701、-0.466,P=0.491、0.646).ConA诱导12 h组和24 h组C6orf120-/-大鼠外周血[12 h:(59.16±11.72)％vs(39.31±5.88)％;24 h:(50.16±5.95)％vs(38.99±5.91)％]和肝脏[12 h:(33.43±6.47)％vs(25.20±3.92)％;24 h:(23.23±4.36)％vs(14.34±2.30)％]中性粒细胞比例均显著高于WT大鼠(P均<0.05),肠系膜淋巴结[12 h:(0.33±0.10)％vs(0.45±0.20)％;24 h:(0.53±0.13)％vs(0.43±0.15)％]和脾脏[12 h:(11.39±4.47)％vs(8.55±5.07)％;24 h:(12.22±2.11)％vs(8.69±5.13)％]中性粒细胞比例差异无统计学意义(P均>0.05).3组间WT大鼠和C6orf120-/-大鼠外周血、肝脏、肠系膜淋巴结及脾脏中性粒细胞比例差异均有统计学意义(P均<0.001).未经ConA诱导组C6orf120-/-大鼠外周血[(2.21±0.78)％vs(4.02±1.23)％]、肝脏[(3.18±0.62)％vs(6.72±1.37)％]、肠系膜淋巴结[(4.28±1.25)％vs(7.18± 2.21)％]和脾脏[(5.42±0.55)％vs(10.19±1.35)％]巨噬细胞比例均显著低于WT大鼠(t值分别为4.291、7.797、3.919、11.388,P均≤0.001).ConA诱导12 h和24 h组C6orf120-/-大鼠肠系膜淋巴结中巨噬细胞比例[12 h:(34.45±8.05)％vs(14.13±6.18)％;24 h:(19.95±6.44)％vs(11.35±1.96)％]显著高于WT大鼠(t=-5.664,P<0.001;t=4.222,P=0.001),外周血[12 h:(17.63±3.69)％vs(22.55±4.73)％;24 h:(21.08±5.73)％vs(18.28±7.84)％]、肝脏[12 h:(24.81±8.06)％vs(25.88±9.91)％;24 h:(9.11±2.84)％vs(9.98±2.55)％]和脾脏[12 h:(15.56±8.16)％vs(13.89±6.23)％;24 h:(18.39±4.08)％vs(18.70±1.88)％]巨噬细胞比例差异无统计学意义(P均>0.05).3组间WT大鼠和C6orf120-/-大鼠外周血、肝脏、肠系膜淋巴结及脾脏巨噬细胞比例差异均有统计学意义(P均<0.001).结论 C6orf120基因敲除可促进中性粒细胞增殖而抑制巨噬细胞增殖.在ConA诱导的大鼠AIH中,C6orf120基因缺失对肝损伤具有保护作用,其机制可能与中性粒细胞和巨噬细胞的免疫调节作用有关.