HBV DNA超敏定量检测试剂盒的性能验证

目的:验证天隆HBV DNA超敏定量检测试剂盒在cobas(R) Z480全自动荧光定量PCR分析仪上的检测性能,以评估其是否满足临床应用要求.方法:参考CNAS-GL039《分子诊断检验程序性能验证指南》和CNAS-CL02-A009《医学实验室质量和能力认可准则在分子诊断领域的应用说明》等相关文件,应用临床血清样本和HBV DNA国家标准物质以及WHO国际标准物质,对精密度、正确度、线性范围、定量限、检出限、抗干扰能力、交叉污染、试剂批间差异、核酸室温放置时间等性能进行验证.结果:该系统检测102、103、106 IU/mL混合血清样本的重复性精密度分别为2.60％、2.43％、0.91％,中间精密度分别为4.41％、3.36％、2.48％;HBV DNA国家标准物质GBW(E)090586 (200 IU/mL)、GBW(E)090137(1.41×103 IU/mL)和GBW(E)090139(4.60×106IU/mL)的实测值与靶值差异均在±0.4 Log10 IU/mL范围内;该系统在2.32×101～2.32×109 IU/mL范围内呈线性(线性回归方程为Y=0.993 2X+0.161 2,R2 =0.998 9);该系统的定量限为30 IU/mL,检出限为10 IU/mL;干扰物质总胆红素(Tb)浓度≤512 μmol/L、血红蛋白(Hb)浓度≤10 g/L、甘油三酯(TG)浓度≤18 mmol/L时,均对检测结果没有明显影响(偏倚＜±7.5％);交叉防污染实验中阳性标本检出率为100％,阴性标本检出率为0,全部阴性样本未受污染;不同批次试剂间检测结果差异符合要求(偏倚＜±7.5％);磁珠法提取的核酸室温放置2h,再进行加样扩增,对检测结果没有明显影响(偏倚＜±7.5％).结论:天隆HBV DNA超敏定量检测试剂盒在全自动荧光定量PCR仪cobas(R) Z480上的检测性能基本符合临床应用要求.