MiR-34a-5p在MLN8237诱导神经母细胞瘤细胞衰老中的作用机制

目的 研究小分子AURKA抑制剂MLN8237诱导神经母细胞瘤细胞衰老的作用机制.方法 利用细胞转染的方法改变SK-N-SH细胞中miR-34a-5p的表达水平,通过SA-β-gal染色方法及流式细胞术检测细胞衰老及细胞周期情况.运用CCK8检测不同处理下细胞增殖的变化情况.RT-PCR及蛋白质免疫印迹(Western blot)方法用来检测细胞中相关基因及蛋白的表达情况.结果 (1)MLN8237在SK-N-SH细胞中可以通过激活P53/P21通路诱导细胞衰老,同时引起miR-34a-5p表达上调(P值均＜0.05).(2)SA-β-gal染色及流式检测细胞周期显示,过表达miR-34a-5p可以引起SK-N-SH细胞衰老,靶向调控衰老相关靶基因SIRT1的表达,并导致P53、P21蛋白及mRNA表达升高(P值均＜0.05),激活P53/P21衰老通路.(3)将miR-34a-5p抑制剂与MLN8237联用后,与单用MLN8237相比可以减少衰老细胞,降低P53、P21的表达(P值均＜0.05),并抑制P53/P21衰老通路,且CCK8结果提示,两者联用可以显著减弱MLN8237对SK-N-SH细胞的增殖抑制作用(P值均＜0.05).结论 在神经母细胞瘤SK-N-SH细胞中MLN8237是通过激活P53/miR-34a-5p/SIRT1反馈环路来诱导细胞衰老的过程.