新型磺酰胺类肿瘤抑制剂DHW-51诱导宫颈癌细胞HeLa凋亡的作用机制

目的 从新合成的甲磺酰胺类化合物库中筛选出一种新型肿瘤抑制剂DHW-51,初步探讨DHW-51对宫颈癌细胞HeLa凋亡的影响及其作用机制.方法 采用细胞增殖抑制实验检测DHW-51作用HeLa细胞12、24和48 h时的细胞存活率,分为对照组和10、15、20、25、30 μmol/L实验组共6组;流式细胞术检测不同浓度DHW-51诱导HeLa细胞的凋亡率及细胞周期;检测细胞内Caspase 3、Caspase 8和Caspase 9活性及细胞凋亡相关蛋白pro-Caspase 3、pro-Caspase 8和poly ADP-ribose polymerase-DNA修复酶(PARP)的表达,分析DHW-51的作用机制.结果 DHW-51对HeLa细胞的增殖具有良好抑制作用.当DHW-51浓度为25 μmol/L作用时间为24 h时,HeLa细胞的存活率仅为(27.34±1.891)％,与对照组相比差异有统计学意义,F=1.369,P＜0.001;随着浓度增加,作用时间延长细胞存活率更低.DHW-51能够有效诱导HeLa细胞凋亡,呈浓度和时间依赖关系;当DHW-51浓度为25 μmol/L作用时间为24 h时,细胞凋亡率为(92.10±1.683)％,与对照组相比差异有统计学意义,t=43.715,P＜0.001;随着时间的延长,晚期凋亡的比例逐步增加,而对细胞周期则没有影响.当DHW-51浓度为20μmol/L时,Caspase 3[(1.87±0.063)％,t=12.43,P＜0.001]和Caspase 9[(2.0±0.069)％,t=9.519,P＜0.05]的活性增加,与对照组相比,差异有统计学意义;Caspase 8的活性无变化.蛋白质印迹结果显示,当DHW-51浓度为20 μmol/L时,pro-Caspase 3[(0.33±0.005)％,t=-89.334,P＜0.001]和pro-Caspase 9[(0.19±0.009)％,t=-48.308,P＜0.001]蛋白表达量下调,pro-Caspase 8蛋白表达无变化,PARP[(0.35±0.012)％,t=14.961,P＜0.001]出现断裂带.结论 新型磺酰胺类化合物DHW-51可以诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡.作用机制初步推测主要是通过由线粒体介导的Caspase依赖途径诱导HeLa细胞凋亡,进而实现抑制肿瘤细胞生长,这一过程与细胞周期阻滞无关.