毛蕊异黄酮抑制甲状腺癌TPC-1细胞增殖的机制

目的 观察毛蕊异黄酮(CA)对人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1细胞增殖的影响,并从TFEB-自噬途径的角度探讨其可能的作用机制.方法 体外培养甲状腺乳头状癌细胞TPC-1细胞,实验分为对照组、CA组、3-MA组和3-MA+CA组.CA组:用含25、50和100μg/mL CA的培养液分别处理TPC-1细胞24、48和72 h.3-MA组:用含5 mmol/L 3-MA的DMEM培养液培养细胞48 h.3-MA+CA组:先用含5 mmol/L 3-MA的DMEM培养液处理细胞0.5 h,然后再加入100μg/mL CA共同继续培养48 h.每组设5个重复孔(n=5).细胞的增殖采用CCK-8法进行检测,通过透射电镜观测细胞的超微结构,自噬相关基因Beclin 1、LC3和p62的表达以及TFEB总蛋白和TFEB在细胞核中表达通过蛋白质印迹检测.结果 与对照组(0.85±0.05和1.13±0.07)比较,CA(50和100μg/mL)处理TPC-1细胞48(0.53±0.04和0.33±0.05)和72 h(0.81±0.06和0.45±0.05)降低了TPC-1细胞的增殖水平,并具有剂量依赖性,差异有统计学意义,F浓度=14.98,F时间=11.41,均P<0.05.与对照组比较,CA(50和100μg/mL)处理48 h组细胞中自噬体的总面积占细胞胞质面积的百分率(分别为1.46％±0.38％、7.91％±0.69％和13.62％±1.46％,F=6.28,P=0.012)、Beclin-1(分别为0.19±0.03、0.45±0.06和0.86±0.07,F=4.82,P=0.005)和LC3-Ⅱ(分别为0.09±0.02、0.35±0.05和0.54±0.06,F=6.74,P=0.007)的蛋白表达水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值(分别为0.25±0.07、0.95±0.03和1.26±0.02,F=5.83,P=0.003)均增加,p62的蛋白表达水平分别为0.57±0.07、0.22±0.03和0.09±0.02,下调并具有剂量依赖性,差异有统计学意义,F=5.74,P=0.023.CA和CA+3-MA组的A值分别为0.35±0.05和0.67±0.09,细胞自噬抑制剂3-MA部分逆转了CA抑制TPC-1细胞增殖的效应,t=5.63,P=0.038.与对照组比较,CA(50和100μg/mL)处理48 h组TFEB在细胞核中的表达(分别为0.17±0.03、0.49±0.06和0.78±0.08,F=6.39,P=0.009)以及TFEB在核中表达与TFEB总蛋白的比值(分别为0.20±0.03、0.57±0.05和0.93±0.06,F=5.43,P=0.016)均增加,并具有剂量依赖性,差异均有统计学意义,均P<0.05.结论 CA抑制人TPC-1细胞的增殖,其机制可能与CA促进TFEB核转位进而促进细胞自噬有关.