人脑胶质瘤细胞来源外泌体的提取鉴定及微环境中的摄取

目的 探讨提取、鉴定及观察细胞对外泌体在微环境中的摄取,为后续开展胶质瘤外泌体相关的研究建立稳定的提取方法,以及更清楚地观察到外泌体奠定基础,为今后研究提供一定的参考.方法 运用超速离心法从人脑胶质瘤细胞培养上清液中分离外泌体以及观察在肿瘤细胞微环境中肿瘤细胞对外泌体的摄取,通过透射电子显微镜观察外泌体的大小、形态特点,通过马尔文粒径分析确定外泌体粒径的大小,应用Western blotting法进行外泌体特异性抗原分子CD63、TSG101的鉴定,采用荧光共聚焦显微镜观察胶质瘤细胞摄取外泌体.结果 通过透射电子显微镜观察到从人脑胶质瘤U251细胞的培养上清液中分离出来的呈圆形杯盘样结构的囊泡样物质,其外形呈典型的杯状和双凹圆盘的扁平球囊体且具备完整的膜结构,粒径大小为30～150 nm,Western blotting结果显示其表达外泌体特异性蛋白CD63、TSG101;外泌体通过细胞内吞噬作用形成、分泌和释放,通过荧光共聚焦显微镜可以证实其有效摄取外泌体,主要集中于细胞质.结论 人脑胶质瘤U251细胞中提取分离得到具有双层膜结构茶托样囊泡物质,鉴定其为外泌体,并能观察细胞摄取外泌体集中分布于细胞质.