靶向沉默PRL-3基因对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化的影响
Journal of International Oncology(2021)
Abstract
目的:观察慢病毒介导的shRNA沉默肝再生磷酸酶-3(PRL-3)基因对肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其对上皮间质转化(EMT)信号通路的调控。方法:将携带PRL-3 shRNA的慢病毒载体转染肺癌A549细胞,建立稳定沉默PRL-3的肺癌细胞株。将细胞分为空白对照组、NC shRNA组(阴性对照组)和PRL-3 shRNA组(PRL-3抑制RNAi慢病毒组)。CCK-8法、平板克隆形成实验、Transwell和侵袭小室实验分别检测各组细胞增殖、迁移和侵袭能力。实时荧光定量PCR检测转染后上皮钙黏素(E-cadherin)、Snail mRNA的相对表达水平。结果:稳定沉默PRL-3的细胞株构建成功,PRL-3 shRNA组PRL-3基因敲减效率达到83.5%。CCK-8法检测A549细胞增殖能力,空白对照组、NC shRNA组和PRL-3 shRNA组24 h吸光度( A)值分别为0.296±0.008、0.342±0.007、0.292±0.004,差异具有统计学意义( F=106.300, P<0.001),PRL-3 shRNA组明显低于NC shRNA组( P<0.001);转染后48、72、96 h,PRL-3 shRNA组细胞增殖能力也明显受到抑制。克隆形成实验结果显示,空白对照组、NC shRNA组、PRL-3 shRNA组细胞集落形成数分别为(166.7±6.7)个、(158.0±6.1)个、(119.7±1.5)个( F=67.290, P<0.001),PRL-3 shRNA组细胞克隆形成能力较NC shRNA组显著下降( P<0.001)。空白对照组、NC shRNA组和PRL-3 shRNA组迁移细胞数分别为(100.0±1.9)个、(98.8±1.9)个和(44.6±7.6)个( F=430.300, P<0.001),PRL-3 shRNA组细胞迁移能力明显低于NC shRNA组( P<0.001);3组侵袭细胞数分别为(117.7±4.1)个、(113.1±6.6)个和(55.6±8.4)个( F=247.200, P<0.001),PRL-3 shRNA组细胞侵袭能力明显低于NC shRNA组( P<0.001)。实时荧光定量PCR检测结果显示,沉默PRL-3表达后,A549细胞中E-cadherin mRNA相对表达水平显著上调,Snail mRNA水平显著下调。 结论:沉默PRL-3表达可抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力,PRL-3可能通过EMT途径影响肺癌细胞的侵袭。
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Key words
Lung neoplasms,Phosphatase of regenerating liver-3,Invasion,Epithelial-mesenchymal transition
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