HPLC-MS/MS法检测白血病患者尿液及血浆中维生素C浓度

目的:建立高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS)法测定白血病患者尿液中维生素C(VC)浓度,并比较HPLC-MS/MS法与干化学法测定结果,分析尿液与血浆中VC浓度的相关性.方法:以L-Ascorbic Acid-1-13C为内标,采用Ultimate XB-C18色谱柱(50 mm×4.6 mm,5 μm),柱温:60℃,流速:0.8 ml·min-1,流动相:甲醇(0.1％甲酸)-纯水(2 mmol·L-1 乙酸胺-0.1％甲酸),梯度洗脱,进样量:5 μl.质谱检测方式采用ESI负离子模式,以多反应监测模式(MRM)扫描,定量检测VC m/z 175.0→115.1,L-Ascorbic Acid-1-13C m/z 176.0→115.8.选取 127例未服用 VC 制剂的白血病患者,分别采用 HPLC-MS/MS法和干化学法测定其尿液中VC含量,对结果进行比较分析;同时采用HPLC-MS/MS法检测患者血浆中VC浓度,对患者尿液和血浆中VC浓度进行相关性分析.结果:尿液中VC浓度在1～100 μg·ml-1范围内线性关系良好(r=0.997 1),低、中、高3个浓度质控样品日内及日间RSD均小于10％,方法回收率为85％～110％.与干化学法相比,HPLC-MS/MS法测得的尿液中VC含量明显较低(P＜0.01),两种方法检测结果符合率为68.50％.127例患者尿液中vC平均含量为(53.99±56.58)μg·ml-1,血浆中VC平均含量为(2.48±2.53)μg·ml-1,尿液VC含量明显高于血浆VC含量,结果相关性较差(r=0.451),血浆与尿液中VC浓度平均比值为0.081 0(0.004 6～0.866 7).结论:与干化学法相比,HPLC-MS/MS法特异性强、灵敏度高,可以准确定量检测白血病患者尿液中VC浓度结果.