miR-143在氧糖剥夺/再灌注引起的星形胶质细胞活化中的作用机制研究

目的 探讨miR-143/HIPK2轴在氧糖剥夺/再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)引起的星形胶质细胞活化中的作用.方法 星形胶质细胞OGD/R处理0,3,6,12h,应用Western blotting检测星形胶质细胞的活化标志物GFAP和蛋白激酶HIPK2表达,实时荧光定量PCR检测miR-143水平变化,免疫荧光染色检测OGD/R处理6h后GFAP表达.对照组、OGD/R模型组给予Anti-Con和Anti-miR-143干预,应用Western blotting检测GFAP表达.采用荧光素酶报告基因技术验证HIPK2是否为miR-143的靶标分子.miR-143和miR-Con以及Anti-miR-143和Anti-miR-Con分别转染星形胶质细胞,应用Western blotting检测HIPK2表达.离体培养星形胶质细胞分为5个处理组,分别为Anti-Con干预的对照组、Anti-Con干预的OGD/R模型组、Anti-miR-143干预的OGD/R模型组、Anti-miR-143和siRNA Con共同干预的OGD/R模型组以及Anti-miR-143和HIPK2 siRNA共同干预的OGD/R模型组,应用Western blotting检测GFAP表达.结果 与对照组相比,OGD/R 6 h处理的星形胶质细胞GFAP表达增高至峰值(P＜0.01),该结果进一步被免疫荧光染色验证,HIPK2表达下调至最低值(P＜0.001),miR-143表达增加(P＜0.01).与Anti-Con干预的对照组相比,Anti-Con干预的OGD/R模型组星形胶质细胞GFAP表达上调(P＜0.01);与Anti-Con干预的OGD/R模型组比,Anti-rniR-143干预的OGD/R模型组星形胶质细胞GFAP表达下调(P＜0.05).miR-143能明显抑制HIPK2基因活性,但对其结合位点突变体没有显著抑制作用.与Anti-miR-143和siRNA Con共同干预的OGD/R模型组比,Anti-miR-143和HIPK2 siRNA共同干预的OGD/R模型组星形胶质细胞GFAP表达水平上调(P＜0.05).结论 OGD/R通过miR-143/HIPK2轴引起星形胶质细胞活化.