食管癌耐药株Eca-109/VCR的建立及其耐药机制初步探讨

目的:建立食管癌耐长春新碱(vincristine,VCR)细胞株Eca-109/VCR,并对其耐药机制进行初步探讨.方法:采用大剂量间歇冲击给药结合时间递增的方法构建食管癌耐药株Eca-109/VCR.倒置显微镜下观察Eca-109/VCR形态变化;细胞计数法绘制Eca-109和Eca-109/VCR的生长曲线并计算倍增时间;CCK-8法检测VCR、fluorouracil(5-FU)、paclitaxel(PTX)对细胞的inhibitory concentration 50(IC50)及其耐药指数;流式细胞术检测细胞周期及凋亡率;免疫细胞化学、Western blot检测Eca-109/VCR细胞P-glycoprotein(P-gp)、multi-drug resistance related protein(MRP)的表达.结果:历时6个月成功构建了Eca-109/VCR.Eca-109/VCR细胞多呈聚团生长状态,对VCR的耐药指数为17.60,并表现出多药耐药,对5-FU、PTX的耐药指数分别为6.59、5.60(P＜0.01).与Eca-109相比,Eca-109/VCR生长倍增时间延长,细胞周期分布改变,G0/G1、S期细胞增多,G2/M期细胞减少,细胞凋亡率下降(P＜0.05);P-gp、MRP蛋白表达升高(P＜0.05).结论:建立了食管癌耐长春新碱细胞株Eca-109/VCR,其多药耐药机制可能与P-gp及MRP表达上调有关.