Online SPE-LC-MS/MS法快速同时分析人血浆中5种CYP450酶探针药及6种代谢物

目的:建立人血浆中主要CYP450酶探针药及其特异代谢物的快速、准确定量分析方法,以开展药物-药物相互作用(DDI)的临床评价.方法:针对5种主要CYP450亚型,选择咖啡因(CYP1A2)、氯沙坦(CYP2C19)、奥美拉唑(CYP2C9)、右美沙芬(CYP2D6,CYP3A4)和咪哒唑仑(CYP3A4)组成鸡尾酒探针药组合.建立一种online SPE-LC-MS/MS方法对给予探针药后的人血浆样本进行分析.血浆样品通过葡萄糖醛酸酶水解进行前处理,采用Spark HySphere-C18 HD(10 mm×2 mm,7 μm)为固相萃取柱,Shiseido MG Ⅲ(2.0 mm×100 mm,5 μm)为分析柱,柱温40℃.以含0.01％甲酸的甲醇-乙腈(1 ︰ 1)-水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.35 mL·min-1.在质谱ESI源、正离子扫描方式下检测5种探针药及相应的6种代谢产物的母离子-子离子对.结果:所建立的分析方法可在5 min完成11种待测成分的分析.对方法学的验证表明所建立的方法对血浆样品分析具有专属性,定量范围内线性良好,无基质效应影响.中和高浓度下待测成分的批内和批间样品的RSD为2.1％～14.2％,LLOQ浓度下为2.1％～15.4％,准确度在86.4％～107.2％范围内.样品在室温、长期冻存、反复冻融及样品架放置条件下稳定性良好.采用该方法对服用鸡尾酒探针药后的人血浆样本进行了分析,检测出的5种探针药及6种代谢物浓度均在定量区间内,其中右美沙芬代谢物3-甲氧基吗啡喃浓度最低,均低于2 ng·mL-1.结论:所建立的Online SPE-LC-MS/MS 分析方法快速、灵敏、准确,可应用于采用鸡尾酒探针的临床DDI研究和代谢酶活性评估.