Dishevelled促进脑胶质瘤增殖的实验研究

目的 探讨Dishevelled表达对脑胶质瘤增殖能力的实验研究.方法 采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)和实时定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)筛选出3株脑胶质瘤细胞系(U373、U251和U87)中Dishevelled表达水平最高的脑胶质瘤细胞系,通过慢病毒转染技术使Dishevelled低表达,构建出低表达Dishev-elled的脑胶质瘤细胞模型.采用细胞增殖生物因子活性检测(CCK)-8实验,观察Dishevelled低表达对脑胶质瘤细胞体外增殖能力的影响.构建荷瘤鼠模型,采用小动物活体成像观察Dishevelled低表达对脑胶质瘤体内增殖能力的影响.结果 RT-PCR和Western blot检测发现,Dishevelled蛋白在3株脑胶质瘤细胞系中均过表达,且在脑胶质瘤U251细胞中表达水平最高;采用慢病毒转染技术敲低Dishevelled的表达,应用CCK-8实验结果显示:a组(Dishevelled敲低)、b组(无关序列)、c组(正常U251细胞)的A 450值分别为:1.41±0.08;2.51±0.04;2.74±0.07.其中a组明显低于b、c组,差异具有统计学意义(P=0.032),而b、c组无明显差异(P=0.834).应用小动物活体成像结果显示:a组(Dishevelled敲低)、b组(无关序列)、c组(正常U251细胞)颅内肿瘤荧光强度分别为:175415±60178;367328±56014;449892±66980.a组荧光强度明显低于b组(P=0.041)和c组(P=0.045),而b、c组之间无明显差异(P=0.745).这表明,低表达Dishevelled可显著下调脑胶质瘤体外和体内增殖能力.结论 Di-shevelled在脑胶质瘤中高表达,并可促进脑胶质瘤增殖,与脑胶质瘤的发生发展密切相关.