miR-218在高浓度葡萄糖诱导大鼠视网膜微血管内皮细胞凋亡中的作用

目的 探讨miR-218 在高浓度葡萄糖诱导大鼠视网膜微血管内皮细胞(rat retinal microvascular endothelial cells,rRMECs)凋亡中的作用及其相关机制.方法 将rRMECs 分为对照组、高糖组、miR-218 阴性抑制组和miR-218 抑制组.对照组细胞用DMEM低糖培养基培养;高糖组在培养基中添加D-葡萄糖,终浓度为25 mmol·L-1;miR-218抑制组及miR-218阴性抑制组是在高糖组培养基的基础上,按照说明书操作,利用Lipo2000 将miR-218 抑制剂和阴性抑制剂转染rRMECs,共同孵育24 h.提取各组rRMECs 总RNA 并分析miR-218 含量,检测细胞活力,计算细胞凋亡率以及采用Western blot检测各组rRMECs Caspase-3 蛋白表达,利用SPSS 19.0 统计学软件对实验数据进行单因素方差分析并进行两两比较.结果 对照组、高糖组、miR-218 阴性抑制组、miR-218 抑制组miR-218 相对表达量分别为1.00±0.08、1.48±0.12、1.46±0.14、1.03±0.08;细胞活力分别为 100.0％、(72.3±7.5)％、(70.7±9.3)％及(98.4±9.4)％;与对照组相比,高糖组和miR-218 阴性抑制组的miR-218 相对表达量明显升高(均为P＜0.05),miR-218抑制组的miR-218相对表达量较对照组变化不显著(P＞0.05);高糖组和miR-218 阴性抑制组rRMECs 细胞活力与对照组相比均明显降低(均为P＜0.05),miR-218抑制组与对照组相比细胞活力未见明显变化(P＞0.05).对照组、高糖组、miR-218 阴性抑制组、miR-218 抑制组rRMECs 细胞凋亡率分别为(2.3±0.0)％、(20.3±3.1)％、(23.1±3.2)％及(2.9±0.1)％;高糖组和miR-218 阴性抑制组的细胞凋亡率均显著高于对照组(均为P＜0.05);而miR-218 抑制组与对照组相比,细胞凋亡率变化不明显,差异无统计学意义(P＞0.05).对照组rRMECs Caspase-3 蛋白相对表达量为(18.6±2.3)％、高糖组为(43.3±4.5)％、miR-218 阴性抑制组为(41.6±3.9)％、miR-218 抑制组为(20.0±2.8)％.与对照组相比,高糖组和miR-218 阴性抑制组的Caspase-3 蛋白相对表达量明显增加(均为P＜0.05),miR-218 抑制组Caspase-3 蛋白相对表达量变化不明显(P＞0.05).结论 高浓度葡萄糖能促使rRMECs miR-218 相对表达量增高;当miR-218 相对表达量增高时,细胞凋亡明显,细胞活力显著下降.细胞内Caspase-3 蛋白的相对表达量明显上调.