高糖和糖浓度波动对人角膜上皮细胞中MMP-9表达及真菌黏附的影响

目的 探讨不同浓度葡萄糖环境下茄病镰刀菌和尖端赛多孢子菌对人角膜上皮细胞(HCEC)的黏附能力和HCEC中MMP-9表达的影响.方法 将处于对数生长期的HCEC分为3组:低糖组(5.5 mmol·L-1葡萄糖培养基培养)、高糖组(25.0 mmol·L-1葡萄糖培养基培养)和糖波动组(5.5 mmol·L-1和50.0 mmol·L-1葡萄糖培养基交替培养),根据干预真菌的不同共分9小组(低糖-对照组、高糖-对照组、糖波动-对照组、低糖-茄病镰刀菌组、高糖-茄病镰刀菌组、糖波动-茄病镰刀菌组、低糖-尖端赛多孢子菌组、高糖-尖端赛多孢子菌组、糖波动-尖端赛多孢子菌组).真菌干预组均加入相应真菌孢子悬液,且孢子与HCEC的比例为10:1,对照组加入等量的无菌生理盐水.观察真菌在培养板上的生长状况,倒置显微镜下观察每组HCEC的形态,荧光白染色法和平板稀释涂布法用于HCEC的黏附真菌计数,利用qRT-PCR检测各组HCEC中MMP-9 mRNA的表达、Western blot检测各组HCEC中MMP-9蛋白的表达.结果 倒置显微镜下可见与真菌共培养的HCEC出现不同程度的形变和脱落,尤以高糖-茄病镰刀菌组和糖波动-茄病镰刀菌组最为显著.荧光白染色法和平板稀释涂布法计数结果显示,两种真菌高糖组和糖波动组对HCEC的黏附量均大于低糖组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);高糖和糖波动条件下,尖端赛多孢子菌黏附量大于茄病镰刀菌,差异均有统计学意义(均为P<0.05).qRT-PCR和Western blot检测结果显示,MMP-9 mRNA和蛋白在各组HCEC中均有表达,与低糖组相比,高糖组和糖波动组HCEC中MMP-9 mRNA和蛋白表达均增多;高糖和糖波动条件下,真菌干预组HCEC中MMP-9 mRNA和蛋白表达均高于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05),而两种真菌干预组之间差异均无统计学意义(均为P>0.05).结论 高糖和糖波动环境能够促进HCEC分泌更多的MMP-9,并增加真菌对HCEC的黏附.