茄病镰刀菌对人角膜上皮细胞NOD2表达及相关炎症因子分泌水平的影响

目的 探讨茄病镰刀菌对人角膜上皮细胞(hCEC)中NOD2表达及下游炎症因子分泌水平的影响.方法 将对数生长期的hCEC分为对照组(无真菌刺激)、真菌刺激组(根据加入真菌浓度不同分为103、104、105、106 CFU·mL-1刺激组),真菌刺激组分别刺激hCEC 4 h、8 h、12 h、16 h,RT-qPCR检测各组hCEC中NOD2 mRNA表达;105 CFU·mL-1茄病镰刀菌孢子刺激12 h、24 h、36 h,Western blot检测各组hCEC中NOD2蛋白表达;细胞免疫荧光法检测NOD2分子定位和表达;103、104、105、106 CFU·mL-1茄病镰刀菌孢子刺激hCEC 36 h,ELISA法检测各组hCEC培养上清液中炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白含量.结果 随着茄病镰刀菌孢子刺激浓度的升高和刺激时间的延长,hCEC中NOD2 mRNA表达逐渐升高,105 CFU·mL-1茄病镰刀菌孢子刺激8 h,hCEC中NOD2 mRNA相对表达水平达到峰值,差异有统计学意义(P<0.05);105 CFU·mL-1茄病镰刀菌孢子刺激hCEC 12 h、24 h、36 h,hCEC中NOD2蛋白相对表达水平逐渐增多,与对照组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05);105 CFU·mL-1茄病镰刀菌孢子刺激24 h后,NOD2主要表达在hCEC细胞质中,其荧光分子表达强度显著增加.随着茄病镰刀菌孢子刺激浓度的增加,hCEC中相关炎症因子的分泌水平增加,104、105、106 CFU·mL-1茄病镰刀菌孢子刺激hCEC 36 h,IL-6、IL-8、TNF-α蛋白含量与对照组相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05).结论 茄病镰刀菌孢子刺激可上调hCEC中NOD2表达并促进相关炎症因子分泌,NOD2参与了hCEC抗茄病镰刀菌的固有免疫反应.