二至丸及不同极性部位含药血清对H2O2诱导的肝细胞衰老的保护作用及物质基础研究

利用H2O2诱导的大鼠肝细胞(BRL)衰老模型探究二至丸及其不同极性部位(石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水和环烯醚萜苷类富集部位)含药血清的抗衰老作用.通过MTT法检测细胞增殖,β-半乳糖苷酶染色实验评估细胞衰老程度,流式细胞术检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的改变.采用快速液相系统-飞行时间质谱(ultra-fast liquid chromatography coupled with quadrupole-time of flight-mass spectrometry,UFLC-Q/TOF-MS)对二至丸及各部位化学成分进行分析,并结合分子对接技术筛选二至丸中可能的抗衰老活性成分.结果显示,600μmol·L-1的H2O2处理细胞72h后可显著诱导细胞衰老,引起细胞增殖抑制、细胞内β-半乳糖苷酶活力和ROS水平的升高.细胞在诱导衰老前预先用二至丸含药血清处理可有效抵抗增殖抑制.除环烯醚萜苷类,二至丸及其他部位含药血清均可降低细胞内β-半乳糖苷酶活力和ROS水平.利用液质联用技术从二至丸中共鉴定出了 49个化学成分并对各部位中的成分进行了比较.通过分子对接筛选出二至丸中14个可能的抗衰老活性组分.结合细胞实验、成分鉴定及分子对接结果,本实验初步推断二至丸抗衰老的有效成分为三萜类、黄酮类和苯乙醇类,为阐明二至丸抗衰老药效物质基础及作用机制提供了参考.