Zebularine通过SFRP2/Dkk3去甲基化调控Wnt/β-catenin信号通路诱导食管癌细胞凋亡

研究去甲基化药物zebularine对食管癌细胞凋亡的影响及其作用机制.采用不同浓度(25、50、100、200和400μmol·L-1) zebularine处理食管癌ECA109和KYSE170细胞,CCK-8法检测细胞活力.选用浓度为100 μmol·L-1 zebularine处理细胞,流式细胞术检测凋亡率,Western blot检测凋亡蛋白(Bcl-2蛋白、Bax蛋白、cleaved-caspase-3蛋白和cleaved-PARP蛋白)和Wnt (wingless-related integration site)信号通路分子(β-catenin蛋白、cyclin D1蛋白和c-Myc蛋白)的表达量,实时荧光定量PCR检测Wnt信号通路上游负调控基因表达水平,甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)法检测人分泌型卷曲相关蛋白2(secreted frizzled related protein 2,SFRP2)和Dkk3(diekkopf3)基因的甲基化状态.敲低SFRP2和Dkk3观察对zebularine诱导凋亡的影响.结果 显示,zebularine能抑制ECA109和KYSE170细胞的活力,呈剂量和时间依赖性;zebularine可诱导细胞凋亡,下调Bcl-2蛋白,上调Bax、cleaved-caspase-3和cleaved-PARP蛋白的表达,并抑制β-catenin、cyclinD1和c-Myc蛋白表达,与阴性对照组比较,差异均具有统计学意义(P＜0.05);zebularine作用后,Dkk3和SFRP2的mRNA表达水平明显升高,SFRP2和Dkk3启动子甲基化水平降低;敲低SFRP2和Dkk3可降低zebularine诱导的细胞凋亡.综上所述,zebularine降低SFRP2和Dkk3基因启动子甲基化水平,促进SFRP2和Dkk3基因表达,进而通过抑制Wnt/β-catenin信号通路诱导食管癌细胞凋亡.