吉祥草活性成分RCE-4与塞来昔布联合应用抗宫颈癌Ca Ski细胞增殖效果与机制研究

本研究旨在探讨RCE-4与非甾体抗炎药联用抗宫颈癌Ca Ski细胞增殖的协同作用及分子机制.采用MTT法和CalcuSyn V2.0软件检测细胞增殖并计算联合用药指数(combination index,Cl);Western blot法分析蛋白表达;Jc-1染色检测线粒体膜电位;吖啶橙/溴化乙锭(acridine orange/ethidium bromide,AO/EB)染色检测细胞凋亡;免疫共沉淀法检测Bcl-2-Beclin 1复合体的相对含量.结果显示,塞来昔布与RCE-4的协同效果最好,最佳协同指数为0.32.二者联用能显著抑制环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)和核转录因子κB(nuclear transcription factor kappa B,NF-κB)的表达,促进非甾体抗炎药活化因子 1(non-steroidal anti-inflammatory drugs activity gene-1,NAG-1)的表达.同时,联用也显著抑制了微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein 3,LC3)-Ⅱ、Beclin 1、p62以及自噬相关基因(autophagy-related gene,ATG)3/4B/5/7/14的表达,促进了线粒体膜电位的去极化,显著抑制了B淋巴细胞瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-xl(B cell lymphoma-xl,Bcl-xl)的表达,促进了Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、Bcl-2/Bcl-xl相关死亡启动因子(Bcl-2/Bcl-xl-associated death promoter,Bad)以及活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase,cleaved-caspase)3/7/9的表达.另外,二者联用也极显著地抑制了 Bcl-2-Beclinl复合体的形成.综上所述,RCE-4与塞来昔布联用可能通过抑制Bcl-2-Beclin 1复合体的形成,抑制RCE-4诱导的自噬并增强其凋亡,从而提高RCE-4对宫颈癌Ca Ski细胞的敏感性.