白介素-36α在烟曲霉感染的人角膜上皮细胞免疫反应中的作用及其机制

目的 研究白细胞介素-36α(IL-36α)在烟曲霉菌感染的永生化人角膜上皮细胞(HCEC)免疫反应中的作用及其机制.方法 烟曲霉菌灭活菌丝刺激体外培养的HCEC细胞,分别采用蛋白免疫印迹(Western Blot)实验及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测细胞中白细胞介素36α(IL-36α)、IL-36 R蛋白及mRNA的表达.将细胞按实验要求分为A、B、C组,A组采用IgG重组蛋白处理HCEC细胞,B、C组分别采用IgG重组蛋白、外源性IL-36α重组蛋白(rhIL-36α)预处理后加入烟曲霉菌灭活菌丝刺激HCEC细胞,分别采用ELISA和RT-PCR方法检测各组细胞中IL-8和肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白和mRNA的表达.将HCEC细胞按照实验需要分为D、E、F组,D组为单纯DMEM培养基培养的HCEC细胞,E组采用rhIL-36α和外源性IL-36Ra重组蛋白(rhIL-36Ra)处理HCEC细胞,F组采用rhIL-36α处理HCEC细胞,采用Western Blot方法检测各组细胞中核因子κB(NF-κB)p65蛋白、磷酸化NF-κB p65(pNF-κB p65)蛋白的表达.将HCEC细胞按照实验需要分为G、H、I组.G组为单纯DMEM培养基培养的HCEC细胞,H组采用烟曲霉菌灭活菌丝刺激HCEC细胞,I组采用Dectin-1中和抗体预处理后,加入烟曲霉菌灭活菌丝刺激HCEC细胞,采用Western Blot及RT-PCR方法检测各组细胞中IL-36α蛋白及mRNA的表达.结果 烟曲霉菌灭活菌丝刺激的HCEC细胞中IL-36α蛋白和mRNA随时间改变表达逐步升高(F=21.88、249.74,P<0.05).C组细胞中IL-8和TNF-α蛋白和mRNA的表达水平明显高于A、B组(F=11.54～95.42,P<0.05).与D、E组相比,F组细胞中pNF-κB p65蛋白的表达水平明显升高,差异均有显著性(F=52.43,P<0.05).I组细胞中IL-36α蛋白和mRNA表达水平较H组明显降低,差异均具有显著意义(F=70.99、34.26,P<0.05).结论 IL-36α在烟曲霉菌感染的人角膜上皮细胞免疫反应中起到促炎的作用,其作用可能是通过IL-36α/IL-36 R/NF-κB信号通路实现的.