均匀设计优化新疆主要葡萄品种ISSR-PCR反应体系

为了建立适用于新疆主要葡萄品种的ISSR-PCR反应体系,本研究以新疆不同葡萄品种DNA为模板,采用均匀设计法,对影响ISSR-PCR体系的Mg2+、dNTPs、引物、Taq DNA聚合酶等进行了U20(54)和U12(34)两轮优化,并在此基础上对退火温度及循环数进行了摸索.结果表明:在一定的浓度范围之内,Mg2+、dNTPs和引物浓度对体系的影响相对较小,而Taq DNA酶浓度对于整个ISSR-PCR体系的影响较大.优化后的25 μL 反应体系包含2.5 mmol/LMg2+,2.0 mmol/L dNTPs,1.0 μmol/L 引物,0.25 U Taq DNA 聚合酶及1.0 μmol/L模板DNA.最后运用优化体系对24份不同葡萄品种的DNA进行扩增验证,结果获得的DNA条带清晰,多态性比较丰富.说明优化后的ISSR-PCR体系可用于新疆不同葡萄种间亲缘关系和遗传多样性等领域的研究.