家蝇抗真菌肽-1A对人肝癌细胞HepG2的影响

目的 探讨家蝇抗真菌肽-1A(MAF-1A)对人肝癌细胞HepG2的作用.方法 取人肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞LO2进行传代培养;采用原核串联表达及镍柱亲和层析法制备MAF-1A,采用显微观察法检测0、50及100mg/L MAF-1A作用HepG2细胞24h后的细胞形态变化,采用噻唑蓝(MTT)法检测0、25、50、100、200、400及800mg/L MAF-1A分别作用于HepG2和LO2细胞24h后的细胞生存率,采用乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测0、25、50、100、200及400mg/L MAF-1A作用HepG2细胞24h后对细胞的破坏性,采用细胞划痕愈合试验检测0、100及200mg/L MAF-1A作用HepG2细胞12和24h后细胞迁移能力的变化;用磷酸盐缓冲液(PBS)将抗凝的人红细胞浓度调节为1％体积分数,以1％Triton X-100为阳性对照组,PBS为阴性对照组,采用红细胞体外溶解试验检测100、200、400、800、1200、1800及2400mg/L MAF-1A作用人红细胞1h后的溶血活性.结果 MAF-1A作用24h后,镜下可见HepG2细胞出现表面皱褶、坏死脱落等细胞病变效应(CPE),且浓度越高、CPE越明显;与0mg/L组比较,各浓度组MAF-1A均对HepG2细胞有抑制作用(P<0.05或P<0.01),并呈浓度依赖性,但对LO2细胞的抑制作用不明显;MAF-1A使细胞释放LDH的量增多,且LDH释放率随着MAF-1A浓度的升高而增大(P<0.01);各浓度组MAF-1A均能抑制HepG2细胞的迁移运动,高浓度组抑制作用更为明显(P<0.05);MAF-1A浓度达2400mg/L时,溶血率<1％.结论 MAF-1A能抑制HepG2细胞的增殖及迁移,但对人正常肝细胞LO2和红细胞无明显毒性作用.