Seipin变化对6-OHDA诱导的PC12帕金森细胞模型自噬及凋亡的影响

目的 探究Seipin蛋白对6-OHDA诱导的PC12帕金森细胞模型凋亡及自噬的影响.方法 PC12细胞分为正常组和加药组(加入6-OHDA构建帕金森模型细胞);将前期构建成功的Seipin敲低及其敲低对照细胞株、Seipin过表达及其过表达对照细胞株分为Seipin敲低对照组(KD-control)、Seipin敲低组(KD)、Seipin敲低对照加药组(KD-control+6-OHDA)及Seipin敲低加药组(KD+6-OHDA),Seipin过表达对照组(OE-control)、Seipin过表达组(OE)、Seipin过表达对照加药组(OE-control+6-OHDA)、Seipin过表达加药组(OE+6-OHDA);采用Western blot检测Seipin、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白1 A/1 B-轻链3(LC3-1 A/B)及凋亡相关蛋白BCL2-Associated X蛋白质(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、裂解型半胱氨酸水解酶3(Cleved caspase-3)蛋白表达水平.结果 6-OHDA处理的PC12细胞中,与正常组比较,6-OHDA处理后Seipin表达降低、p-mTOR/mTOR的比值降低、Bec-lin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Bax/Bcl-2、Cleved caspase-3的表达升高(P<0.01);在Seipin敲低后,KD相较于KD-con-trol,p-mTOR/mTOR的比值升高、自噬相关蛋白Beclin1及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达均降低,凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2和Cleved caspase-3表达均升高(P<0.05),过表达Seipin与敲低Seipin结果相反;加药处理后KD+6-OHDA相对KD-control+6-OHDA,Seipin含量降低,p-mTOR/mTOR的比值升高、自噬相关蛋白Beclin1及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达均降低,凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2和Cleved caspase-3表达均升高(P<0.05);在Seipin过表达组中,过表达Seipin与敲低Seipin结果相反.结论 6-OHDA诱导的细胞损伤可能是通过减少Seipin蛋白的表达实现,上调Seipin蛋白的表达可对6-OHDA诱导的细胞损伤具有抑制作用.