AKT通路在大鼠弥漫性轴索损伤中的作用

目的 研究AKT信号通路在弥漫性轴索损伤(diffuse axonal injury,DAI)中的作用.方法 雄性SD大鼠48只按随机数字表法平均分为对照组、DAI 1 d组、DAI 1 d+溶剂(vehicle)组、DAI 1 d+LY294002(LY)组.对照组为正常大鼠,仅接受麻醉;利用瞬间旋转损伤装置建立大鼠DAI模型,DAI 1 d+vehicle组在造模后即刻侧脑室注射二甲基亚砜(DMSO),DAI 1 d+LY组在造模后即刻侧脑室注射LY294002(AKT通路抑制剂,以DMSO溶解).利用免疫组化检测神经微丝蛋白-H(NF-H)的表达;利用Western blot检测cleaved Caspase-3(C-Caspase-3)、Caspase-3、Occludin-1、闭锁小带蛋白1(ZO-1)、Claudin-5、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、β淀粉样前体蛋白(β-APP)、Tau46、胶质纤维酸性蛋白(GFAG)、Iba-1的表达;利用Western blot检测蛋白激酶B(AKT)及GSK-3β的磷酸化水平.结果 与对照组相比,DAI 1 d组NF-H的表达明显升高(P<0.05);DAI 1 d组、DAI 1 d+vehicle组、DAI 1 d+LY组的Caspase-3、C-Caspase-3、MMP-9、β-APP、GFAP、Iba-1的表达升高(均P<0.05),Oc-cludin-1、Claudin-5、ZO-1、Tau46的表达减少(均P<0.05),p-AKT及p-GSK-3β的水平降低(均P<0.05).与DAI 1 d组相比,DAI 1 d+vehicle组Caspase-3、C-Caspase-3、MMP-9、β-APP、GFAP、Iba-1、Occludin-1、Claudin-5、ZO-1、Tau46、p-AKT及p-GSK-3β的表达均无明显差异(均P>0.05);DAI 1 d+LY组的Caspase-3、C-Caspase-3、MMP-9、β-APP、GFAP、Iba-1的表达量更高(均P<0.05),Occludin-1、Claudin-5、ZO-1、Tau46的表达量更少(均P<0.05),p-AKT、p-GSK-3β的水平更低(均P<0.05).结论 DAI后AKT通路被抑制,其通过调控下游GSK-3β的磷酸化水平破坏血脑屏障,加重轴索损伤和细胞凋亡.