ZM447439对乳腺癌细胞运动能力及凋亡的影响

目的 研究ZM447439对三阴性乳腺癌(TNBC)MDA-MB-231细胞运动能力和凋亡的影响及其作用机制.方法 用不同浓度ZM447439处理MDA-MB-231细胞,MTT法检测细胞24,48 h增殖抑制率.PI染色流式细胞术检测多倍体细胞形成,免疫荧光检测细胞多核形成.AnnexinⅤ/PI双染流式细胞术观察不同浓度下ZM447439诱导MDA-MB-231细胞凋亡情况.Western blotting检测CyclinB1和Aurora激酶,Histone H3,Cofilin-1,cdc25c,cdc2及其磷酸化水平的改变,凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax,PARP的表达变化.划痕实验及趋化实验观察细胞迁移和趋化能力.结果 不同浓度Aurora激酶抑制剂ZM447439(0,0.01,0.1,1,10μmol/L)处理MDA-MB-231细胞24 h后,细胞增殖抑制率分别为(1.21±0.01)％,(3.11±0.11)％,(19.27±0.17)％,(22.72±0.24)％和(62.23±0.03)％;不同浓度ZM447439(0,0.01,0.1,1,10μmol/L)处理MDA-MB-231细胞48 h后,细胞增殖抑制率分别为(3.45±0.02)％,(15.61±0.14)％,(39.35±0.25)％,(43.46±0.13)％和(84.17±0.01)％.流式细胞术结果显示,1μmol/L ZM447439作用于乳腺癌细胞48 h可观察到多倍体细胞,并且免疫荧光显示多核形成.0.1,1,10μmol/L ZM447439作用处理MDA-MB-231细胞后,与对照组(0μmol/L)相比,细胞凋亡率均明显升高[(17.4±2.2)％,(28.5±3.1)％,(51.8±5.4)％vs(0.6±0.2)％,P<0.05].0,0.01,0.1,1,10μmol/L ZM447439处理细胞,随着药物浓度增加,磷酸化cdc25c,cdc2的表达逐渐增加,CyclinB1、Aurora激酶及Cofilin-1的磷酸化表达逐渐减少,抗凋亡蛋白Bcl-2表达逐渐减少,促凋亡蛋白Bax、PARP蛋白剪切逐渐增加.与0μmol/L相比,0.01,0.1,1,10μmol/L ZM447439可显著延长划痕愈合时间,减少趋化穿膜细胞个数,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 ZM447439可通过抑制Aurora激酶及Cofilin-1磷酸化水平而抑制TNBC细胞增殖、运动,从而抑制侵袭及转移,诱导凋亡.