血小板活化对肠微血管内皮细胞血管生成影响的实验研究

目的 研究活化血小板诱导的血管生成对肠微血管内皮细胞(Intestinal microvascular endo-thelial cells,IMECs)上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响及机制.方法 将IMECs细胞作为研究对象,以活化的血小板刺激,观察比较加入PI3K/mTOR抑制剂BEZ235前后,IMECs细胞迁移、管腔形成能力的变化来研究活化的血小板对IMECs血管生成的影响,观察对PI3K/AKT/mTOR信号通路磷酸化相关蛋白及HIF-1α的蛋白表达的影响,以及对纤维化相关因子E-cadherin、α-SMA、Collagen Ⅰ蛋白表达变化和基因表达水平的影响.结果 经培养得到的IMECs经倒置显微镜形态学特征鉴定95％以上为内皮细胞特征.静息血小板加入ADP后,FCM检测P-selectin抗体浓度明显增加(P＜0.01),表明活化血小板数量明显增加.加入PI3K/mTOR抑制剂BEZ235可显著抑制活化的血小板刺激增强了 IMECs的细胞迁移能力、管腔形成的能力(P＜0.01).PI3K/AKT/mTOR蛋白无明显变化(P＜0.05),而磷酸化蛋白水平明显受到抑制,HIF-1α、α-SMA、CollagenⅠ的蛋白生成及基因表达明显受到抑制(P＜0.01),而E-cadherin蛋白生成及基因表达则上调(P＜0.01).结论 活化血小板诱导的IMECs细胞EMT的机制可能是通过PI3K/mTOR/AKT信号通路促进血管生成实现的.