pTWIN质粒的改造及凋亡素组合肽基因工程菌的构建

目的 构建凋亡素组合肽基因工程菌,改善组合肽的纯化工艺.方法 以pTWIN1质粒为表达载体,构建凋亡素组合肽基因工程菌,对质粒进行改造,用6-His取代几丁质结合蛋白,实现用镍离子柱替换几丁质柱,一次层析纯化组合肽.结果 构建了高水平表达凋亡素组合肽的基因工程菌;对pTWIN1质粒进行改造,用镍离子柱替代几丁质亲和柱纯化组合肽,实现了通过镍离子柱一次层析直接获得组合肽,内含肽自动断裂,不需要酶切,改造后的pTWIN1载体适用于凋亡素组合肽的开发,建立了纯化重组凋亡素组合肽方法.结论 成功构建了高水平表达凋亡素组合肽的基因工程菌,成功地对pTWIN1质粒进行改造,为在生产中用镍离子柱纯化组合肽降低成本奠定了基础.