连翘叶乙醇提取物抗小鼠蓖麻油性腹泻活性及其对家兔离体空肠平滑肌自发性收缩的影响研究

背景 中医药治疗腹泻具有疗效迅速、不良反应少、费用低廉等优势.连翘具有清热解毒、消肿散结的功效,目前就其治疗腹泻方面的研究鲜有报道.目的 观察连翘叶乙醇提取物(FS ext)对小鼠蓖麻油性腹泻的影响,并研究其对家兔离体空肠平滑肌自发性收缩的影响及其作用机制.方法 2018年6—12月,于四川省南充市采集连翘叶并经提取得到FS ext,采用高效液相色谱法分析FS ext的化学成分;取60只禁食4 h(可自由饮水)的小鼠随机分为0.5 g/kg FS ext试验组、1.0 g/kg FS ext试验组、2.0 g/kg FS ext试验组、4.0 g/kg FS ext试验组、8.0 g/kg FS ext试验组、16.0 g/kg FS ext试验组,每组10只,分别给予0.5 g/kg、1.0 g/kg、2.0 g/kg、4.0 g/kg、8.0 g/kg、16.0 g/kg的FS ext进行灌胃,记录14 d内小鼠的死亡情况和毒性迹象,建立相应的剂量-效应曲线,从而确定FS ext的半数致死剂量(LD50),以确定其安全性.另取50只小鼠随机分成阴性组、阳性组、0.25 g/kg FS ext试验组、0.50 g/kg FS ext试验组、1.00 g/kg FS ext试验组,每组10只,阴性组给予0.9％氯化钠溶液(20 ml/kg)灌胃,阳性组给予洛哌丁胺(4 mg/kg)灌胃,0.25 g/kg FS ext试验组、0.50 g/kg FS ext试验组、1.00 g/kg FS ext试验组分别给予0.25、0.50、1.00 g/kg FS ext.给药30 min后,小鼠均给予蓖麻油0.4 ml灌胃,观察4 h内以下指标:初始半固体粪便时间,固体、半固体、液体粪便数量.采用腹泻指数(EI)评估腹泻的严重程度.取42只健康家兔,制备离体空肠平滑肌,观察FS ext对离体空肠平滑肌自发性收缩的影响:分别用乙酰胆碱(ACh,10μmol/L)和氯化钾(KCl,60 mmol/L)预处理离体空肠平滑肌,来探究FS ext对其诱导的离体空肠平滑肌自发性收缩的影响;用含FS ext或维拉帕米(1μmol/L)的无Ca2+高K+台式液预处理离体空肠平滑肌,然后累计CaCl2进一步研究其机制.结果 FS ext中主要含连翘苷和连翘酯苷A等化学成分;小鼠按不同剂量的FS ext进行灌胃后,在观察期内未出现任何死亡或毒性迹象.阳性组初始半固体粪便时间长于阴性组、0.25 g/kg FS ext试验组、0.50 g/kg FS ext试验组(P<0.05);1.00 g/kg FS ext试验组初始半固体粪便时间长于阴性组、0.25 g/kg FS ext试验组(P<0.05).阴性组EI高于阳性组、1.00 g/kg FS ext试验组(P<0.05);0.25 g/kg FS ext试验组、0.50 g/kg FS ext试验组EI高于阳性组(P<0.05).FS ext(0.01～10.00 mg/ml)以剂量依赖性的方式抑制家兔离体空肠平滑肌的自发性收缩,并抑制由ACh和KCl诱导的空肠收缩,同时,FS ext也能抑制CaCl2诱导的空肠平滑肌自发性收缩,并使CaCl2量-效关系曲线右下移,与维拉帕米引起的CaCl2量-效关系曲线变化类似.结论 FS ext有明显的抗小鼠蓖麻油性腹泻作用,并能抑制家兔离体空肠平滑肌的自发性收缩及ACh和KCl诱导的空肠收缩,其机制可能与阻断M受体和抑制L-型钙离子通道有关.